阿魏酸鈉對幼大鼠心肌柔紅霉素損傷的保護效應(yīng)及其機制.pdf

1、目的：
　　探討阿魏酸鈉(SF)對柔紅霉素(DNR)損傷心肌的保護效應(yīng),并探討其機制。
　　方法：
　　【體內(nèi)】雄性SD大鼠,22±2日齡,體重60~80g,70只隨機分7組(n=10)。正常對照組(Control)、模型組(DNR)、不同劑量(12.5、25、50、100、200mg/Kg)SF干預(yù)組。Control組,大鼠腹腔注射生理鹽水(NS,5ml/Kg),每周1次,共5次;DNR組、不同劑量SF干預(yù)組,5次腹

2、腔注射均為DNR(2.5mg/Kg)。其中Control組、DNR組自第1次注射DNR開始腹腔注射NS(5ml/kg.d),不同劑量SF干預(yù)組分別腹腔注射不同劑量(12.5、25、50、100、200mg/kg.d)SF,均連續(xù)30d。各組大鼠在末次給藥后第5d,取血漿測LDH和CK含量、描記分析大鼠體表心電圖、左心室插管測大鼠左心室血流動力學指標(HR、LVSP、LVDP、+dp/dtmax和–dp/dtmax),取心肌組織測SOD和

3、MDA含量、HE染色觀察心肌組織學結(jié)構(gòu)、電鏡檢測心肌細胞超微結(jié)構(gòu);TUNEL法檢測心肌細胞凋亡;Real-timePCR檢測心肌cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、、Caspase9和Caspase3基因表達;免疫印跡檢測心肌β-Tubulin、CaM、cTnI蛋白表達和線粒體Cyt-c釋放。
　　【體外】采用H9C2大鼠心肌細胞株柔紅霉素(DNR)1μM處理24h,建立心肌細胞DNR損傷體外實驗?zāi)Ｐ?。M

4、TT法檢測細胞存活率,檢測心肌細胞培養(yǎng)上清LDH和CK含量,流式細胞術(shù)檢測心肌細胞凋亡率,DCF-DA熒光試劑法檢測心肌細胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量,Flou-3熒光試劑法檢測心肌細胞[Ca2+]i含量,Real-timePCR檢測心肌細胞cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表達,免疫印跡檢測心肌細胞β-Tubulin、CaM、cTnI、p38MAPK、細胞核NF-κB蛋白

5、表達和線粒體Cyt-c釋放。
　　結(jié)果：
　　【體內(nèi)】幼大鼠腹腔注射DNR5次累積劑量12.5mg/kg造成幼大鼠心肌DNR損傷,表現(xiàn)為大鼠一般狀態(tài)差、體重不增、甚至死亡,心肌酶外漏,體表心電圖非特異性改變,左心室收縮舒張功能下降,心肌組織和心肌細胞超微結(jié)構(gòu)損傷,心肌細胞凋亡,心肌組織MDA升高、SOD降低,心肌cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表達、心肌β-

6、Tubulin、CaM、cTnI蛋白表達改變,線粒體Cyt-c釋放增加。SF干預(yù)呈劑量相關(guān)性地保護幼大鼠心肌減輕DNR損傷。
　　【體外】H9C2大鼠心肌細胞DNR1μM作用24h造成心肌細胞DNR損傷,表現(xiàn)為心肌細胞存活率降低,細胞培養(yǎng)上清LDH和CK含量增高,細胞凋亡率升高,細胞內(nèi)ROS、[Ca2+]i升高,cTnI、CaM、LTCc(1aC)、SERCA2、RyR2、Caspase9和Caspase3基因表達、β-Tubul

7、in、CaM、cTnI、p38MAPK、細胞核NF-κB蛋白表達改變,線粒體Cyt-c釋放增加。SF(15.625~62.5Μm)與1μMDNR共孵育H9C2大鼠心肌細胞24h,SF呈劑量相關(guān)性地保護心肌細胞減輕DNR損傷。
　　結(jié)論：
　　1、幼大鼠腹腔注射DNR累積劑量12.5mg/kg可制備幼大鼠在體心肌DNR損傷模型;H9C2大鼠心肌細胞1uMDNR處理24h可制備離體心肌細胞DNR損傷模型。
　　2、阿魏酸鈉