BMP-2誘導(dǎo)低氧環(huán)境下BMSCs向軟骨表型分化.pdf

1、目的：探討B(tài)MP-2聯(lián)合低氧環(huán)境誘導(dǎo)BMSCs向成軟骨生成分化的可行性，并進(jìn)一步研究其生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)4周齡健康清潔級雌性SD大鼠BMSCs，取第2代細(xì)胞根據(jù)培養(yǎng)條件不同將實(shí)驗(yàn)分為4組：常氧對照組(A組)、常氧加BMP-2誘導(dǎo)液組(B組)、低氧對照組(C組)和低氧加BMP-2誘導(dǎo)液組(D組)。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，阿利新藍(lán)染色檢測各組軟骨基質(zhì)糖胺聚糖(glycosaminoglycans，GAG)分泌水

2、平，Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型膠原和低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)蛋白表達(dá)水平，RT-PCR檢測成軟骨、成骨以及低氧相關(guān)基因表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：D組誘導(dǎo)21天，細(xì)胞變?yōu)轭悎A形，細(xì)胞密度明顯減少，細(xì)胞周邊呈陷窩樣，基質(zhì)包裹細(xì)胞，而A、B和C組均未見上述典型變化。D組阿利新藍(lán)染色較其他組明顯深染，并隨誘導(dǎo)時(shí)間延長，藍(lán)染加深，21天時(shí)出現(xiàn)成片深染藍(lán)色，其他實(shí)驗(yàn)組

3、各時(shí)間點(diǎn)僅見散在少量的淡染藍(lán)色。Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白表達(dá)水平D組較其他實(shí)驗(yàn)組顯著增高(P<0.05)，HIF-1α蛋白表達(dá)水平C、D組較A、B組顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RT-PCR檢測D組成軟骨分化相關(guān)指標(biāo)COL2α1、Agg表達(dá)最高，而B組成骨分化相關(guān)指標(biāo)COL1α1、ALP、RUNX2表達(dá)水平最高，C和D組低氧相關(guān)的指標(biāo)HIF-1α較A和B組顯著增強(qiáng)(P<0.05)。
　　 結(jié)論