TFF3通過Twist調(diào)節(jié)自噬相關(guān)分子機制初探.pdf

1、目的
　　哺乳動物TFF家族包含三個成員:TFF1(Ps2)，TFF2（解痙肽）和TFF3（腸三葉因子），其共同的特征為二級結(jié)構(gòu)中含有三葉草形狀的結(jié)構(gòu)域，這種特殊的結(jié)構(gòu)使整個肽鏈扭曲、折疊，具有較強的抗酸、耐熱及抗蛋白酶水解的能力。TFFs主要在哺乳動物的消化道中表達(dá)，在黏膜防御、修復(fù)和再生等過程中發(fā)揮重要作用。研究表明，在炎癥、癌癥等病理狀態(tài)下，TFF3的表達(dá)多為上調(diào)。TFF3在腫瘤發(fā)生過程中參與細(xì)胞生長、遷移和改變細(xì)胞間粘連，

2、與腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　Twist基因是最早在果蠅中發(fā)現(xiàn)的一種堿性螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子，有研究發(fā)現(xiàn)，在人類多種惡性腫瘤的細(xì)胞株及組織中，均可檢測到Twist的表達(dá)。Twist具有癌基因的特征，能編碼凋亡抑制蛋白并參與腫瘤細(xì)胞的抗藥性機制，在人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和復(fù)發(fā)中具有重要作用。本小組前期數(shù)據(jù)顯示在IEC細(xì)胞中TFF3過表達(dá)情況下，Twist分子的表達(dá)上調(diào)。
　　細(xì)胞自噬可以幫助細(xì)胞清除和降解受損、衰老以

3、及失去功能的細(xì)胞、細(xì)胞器及變性的蛋白等大分子，為細(xì)胞提供循環(huán)能量。細(xì)胞自噬與腫瘤的關(guān)系密切，在不同的腫瘤中自噬的活性各異，此外在腫瘤發(fā)生發(fā)展的不同階段，自噬的活性也不盡相同。在多數(shù)腫瘤細(xì)胞中，自噬的活性降低，但是在結(jié)直腸癌細(xì)胞中，自噬保持了較高的活性。
　　本研究意在探討TFF3高表達(dá)對IEC自噬生物學(xué)特性的調(diào)節(jié)作用，初步探討TFF3與自噬相關(guān)的分子機制，以期為TFF3異常高表達(dá)的炎性相關(guān)腫瘤的研究提供新靶點。
　　方法

4、r>　　1、構(gòu)建實驗相關(guān)質(zhì)粒。
　　2、WesternBlot技術(shù)檢測TFFs和Twist作用下自噬相關(guān)分子LC3B和Atgs的表達(dá)。
　　3、激光共聚焦技術(shù)進一步證實TFF3調(diào)節(jié)LC3B的表達(dá)。
　　4、RT-PCR技術(shù)和WesternBlot技術(shù)檢測TFF3和Twist調(diào)節(jié)mTOR的表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1、成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pCMV-Flag-TFF1等。
　　2、TFF1、TFF2和TFF