轉(zhuǎn)錄因子E2F1通過SRC3調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞成熟機(jī)制的研究.pdf

1、作為免疫系統(tǒng)中最重要的抗原遞呈細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞起到起始適應(yīng)性免疫應(yīng)答并連接固有免疫應(yīng)及適應(yīng)性免疫應(yīng)答的作用。樹突狀細(xì)胞的成熟和活化，需要多個(gè)信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子的協(xié)調(diào)，目前發(fā)現(xiàn)和報(bào)道的大部分研究集中于樹突狀細(xì)胞成熟和分化的正向調(diào)控。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究觀察到E2F1負(fù)調(diào)控樹突狀細(xì)胞成熟，提示了一個(gè)樹突狀細(xì)胞可能的反饋調(diào)節(jié)通路。為此，該研究擬深入探討和揭示E2F1反饋調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞成熟和分化的可能分子機(jī)制。
　　 SRC3是細(xì)胞代謝中

2、重要的共激活因子，以往曾有報(bào)導(dǎo)SRC3是E2F1的調(diào)控基因。另外報(bào)導(dǎo)還發(fā)現(xiàn)，SRC3敲除小鼠中淋巴瘤發(fā)病率提高，提示其可能參與免疫細(xì)胞的成熟以及分化。
　　 本研究中，在對(duì)敲低E2F1的DC2.4細(xì)胞中檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SRC3的表達(dá)水平下調(diào);而在E2F1過表達(dá)細(xì)胞中，SRC3的表達(dá)水平也隨著E2F1的高表達(dá)上調(diào)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示SRC3可能是E2F1的靶基因。深入研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，改變SRC3表達(dá)時(shí)，引起了包括AKT及p38等多條與樹突

3、狀細(xì)胞成熟相關(guān)的信號(hào)通路的變化，同時(shí)部分樹突狀細(xì)胞表面受體也發(fā)生了顯著的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示E2F1可能通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)SRC3，負(fù)調(diào)控樹突狀細(xì)胞成熟。為進(jìn)一步揭示轉(zhuǎn)錄因子E2F1對(duì)SRC3的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制，對(duì)SRC3啟動(dòng)子序列進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其中含有多個(gè)E2F1和Sp1潛在靶位點(diǎn)。在DC2.4細(xì)胞中敲低Sp1，檢測(cè)證實(shí)Sp1可負(fù)調(diào)控SRC3。目前已構(gòu)建了含有SRC3啟動(dòng)子序列上游-600-+58片度的報(bào)告基因質(zhì)粒以及一系列截短質(zhì)粒，細(xì)致地研究E