組蛋白去乙?；敢种苿㎜BH589抑制膠質(zhì)母細胞A172增殖及誘導凋亡機制研究.pdf

1、目的：探討組蛋白乙?；敢种苿㎜BH589對膠質(zhì)母細胞A172抑制增殖和誘導凋亡的作用及膠質(zhì)母細胞相關蛋白P53、BCL-2、BAX表達的規(guī)律和意義。
　　 方法：
　　 1.應用細胞培養(yǎng)技術，將膠質(zhì)母細胞瘤細胞系A172種植于96孔板，并隨機分成：A1組(對照組)，B1組(LBH58910nmol/L組)，C1組(LBH58920nmol/L組)，D1組(LBH58930nmol/L組)，E1組(LBH58940nmo

2、l/L組)及F1組(LBH58950nmol/L)。
　　 應用四氮唑比色(MTT)法，分別在24h、48h、72h時間點，檢測各組膠質(zhì)母細胞系A172細胞增殖情況。并在相差顯微鏡200倍下，觀察48h時細胞形態(tài)結構的變化并拍照。
　　 2.根據(jù)MTT法結果，當LBH589在劑量為20nmol/L、30nmol/L、40nmol/L時，可出現(xiàn)顯著抑制A172細胞的生長，但隨著時間及劑量增加而抑制率變化不大。將細胞種植于6

3、孔板后，隨機分成：A2組(對照組)，B2組(LBH58910nmol/L組)，C2組(LBH58920nmol/L組)及D2組(LBH58950nmol/L組)。觀察對照組及實驗組在48h時A172細胞的遷移能力，并用相差顯微鏡拍照。流式細胞術檢測對照組及實驗組A172細胞在48h時周期變化及細胞的凋亡率。應用細胞免疫熒光技術檢測相關蛋白P53、BCL-2、BAX在膠質(zhì)母細胞內(nèi)的表達。通過免疫組化技術檢測相關蛋白P53、BCL-2、BA

4、X經(jīng)對照組及實驗組在48h時LBH589對膠質(zhì)母細胞系A172的干預變化情況。
　　 結果：
　　 1、MTT法檢測表明，采用不同濃度梯度及不同時間梯度LBH589干預膠質(zhì)母細胞系A172細胞，細胞增殖差異有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 2、相差顯微鏡檢查結果：細胞形態(tài)學上可見，LBH589處理48h后膠質(zhì)母細胞系A172細胞與對照組之間有明顯改變。
　　 3、流式細胞術檢測結果：LBH589干

5、預A172細胞可以誘導凋亡，導致細胞周期G0-G1期阻滯。
　　 4、細胞免疫熒光檢測結果：在A172細胞胞核及細胞質(zhì)中均存在BAX、P53、BCL-2。
　　 5、細胞免疫組化檢測：A172細胞經(jīng)LBH589干預后可以上調(diào)相關蛋白BAX、P53，下調(diào)抗凋亡蛋白BCL-2。
　　 結論：組蛋白乙酰化酶抑制劑LBH589可有效抑制人腦膠質(zhì)母細胞A172細胞增殖生長，存在時間-濃度依賴性，引起A172細胞凋亡誘導，阻