植物乳酸桿菌的代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)人舌鱗癌CAL-27細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：
　　口腔癌（oral cancer）是發(fā)生于口腔的惡性腫瘤之總稱，每年新發(fā)病例超過30萬。目前，口腔癌主要采用化療、放療、手術(shù)等綜合治療手段進(jìn)行治療，但經(jīng)過手術(shù)，放療和化學(xué)治療后，低于50％的患者能長(zhǎng)期生存下來，且復(fù)發(fā)率很高，高達(dá)70%；此外，還存在毒性較大、臟器功能喪失和易產(chǎn)生耐藥性等其他缺陷。植物乳酸桿菌被公認(rèn)為益生菌之一，能夠調(diào)節(jié)胃腸道微生態(tài)菌群平衡、改善肝功能，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫效應(yīng)。目前乳酸桿菌及其代謝產(chǎn)物

2、抗腫瘤的作用已經(jīng)引起了國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)將植物乳桿菌代謝產(chǎn)物在體外直接作用于口腔癌細(xì)胞，評(píng)價(jià)其對(duì)口腔癌細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響，為益生菌的代謝產(chǎn)物在治療口腔癌方面提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　1、考察植物乳桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)人舌鱗癌細(xì)胞系 CAL-27細(xì)胞增殖的抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
　　2、探討植物乳酸桿菌發(fā)酵乳清蛋白獲得的代謝產(chǎn)物以及Ca2+對(duì)人舌鱗癌CAL-27細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用。

3、
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1、植物乳桿菌23201分別經(jīng)復(fù)原乳清培養(yǎng)基和復(fù)原乳清菊糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，制備相應(yīng)的代謝產(chǎn)物1（LPM1）和代謝產(chǎn)物2（LPM2）；采用MTT法檢測(cè)LPM1和LPM2對(duì)CAL-27細(xì)胞增殖的抑制作用；通過吖啶橙染色法，在熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；采用瓊脂糖凝膠電泳法對(duì)LPM1和LPM2作用CAL-27細(xì)胞后的DNA片段的分析。
　　2、植物乳桿菌23201經(jīng)復(fù)原乳清菊糖培養(yǎng)基培養(yǎng)，制備相應(yīng)

4、的代謝產(chǎn)物1（LPM1）。利用草酸鈉溶液沉淀LPM1中的Ca2+獲得不含Ca2+的代謝產(chǎn)物（LPM1-F）；采用MTT法檢測(cè)不同濃度的LPM1和LPM1-F對(duì)CAL-27細(xì)胞體外增殖的抑制作用；通過吖啶橙染色法觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；采用Annexinv-FITC/PI雙染試劑盒檢測(cè)早期凋亡率。
　　結(jié)果：
　　1、不同濃度LPM1和LPM2分別作用CAL-27細(xì)胞24 h，最大抑制率分別達(dá)到(44.2±3.3)%和（41

5、±4.1）%；熒光顯微鏡下觀察，凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核不規(guī)則，凝聚呈新月形或馬蹄形；瓊脂糖凝膠電泳顯示出典型的DNA ladder。
　　2、不同濃度 LPM1和LPM1-F分別作用CAL-27細(xì)胞24 h，最大抑制率分別達(dá)到(48.81±4.96)%和（56.70±2.33）%；熒光顯微鏡下觀察，凋亡細(xì)胞皺縮，凝聚呈新月形或馬蹄形，貼壁不良；流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示：經(jīng)LPM1和LPM1-F處理的CAL-27細(xì)胞早期凋亡率均高于對(duì)照組。