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文檔簡介
1、目的:生姜作為“嘔家圣藥”在我國應用歷史悠久,可用于妊娠、術后及化療引起的嘔吐。姜辣素是從生姜中提取的活性成分,可對抗順鉑引起的嘔吐。本文應用新型水貂嘔吐模型,開展對姜辣素抗阿撲嗎啡、洛哌丁胺和硫酸銅誘導的嘔吐作用及其機制的研究。
方法:
1.姜辣素在阿撲嗎啡誘導的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究將雄性水貂隨機分為:①空白對照組、②阿撲嗎啡組、③姜辣素低、中、高劑量組,每組6只??瞻讓φ战M和阿撲嗎啡組分別給以生理鹽
2、水和1%西黃耆膠5ml·kg-1ig預處理;姜辣素低、中、高劑量組分別予姜辣素50mg·kg-1ig、100mg·kg-1ig、200mg·kg-1ig預處理。除空白對照組外,其余水貂在預處理30min后給予阿撲嗎啡0.5mg·kg-1sc,觀察水貂在給阿撲嗎啡后的嘔吐反應,記錄嘔吐潛伏期,干嘔,嘔吐次數。2h觀察期結束后,處死水貂,取極后區(qū),一部分置4%甲醛中固定,備測SP、c-fos的免疫組化表達;另一部分置于-80℃冰箱中冷凍,備
3、用Western-blot法檢測NK1受體表達。
2.姜辣素在洛哌丁胺誘導的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究
將雄性水貂隨機分為:①空白對照組、②洛哌丁胺組、③姜辣素低、中、高劑量組,每組6只??瞻讓φ战M和洛哌丁胺組分別給以生理鹽水和1%西黃耆膠5ml·kg-1ig預處理;姜辣素低、中、高劑量組分別予以姜辣素50mg·kg-1ig、100mg·kg-1ig、200mg·kg-1ig預處理。除空白對照組外,其余水貂在
4、預處理30min后給予洛哌丁胺0.5mg·kg-1sc,觀察水貂在給洛哌丁胺后的嘔吐反應,記錄嘔吐潛伏期,干嘔,嘔吐次數。觀察2h后,處死水貂,取極后區(qū),備測SP、c-fosNK1受體表達。
3.姜辣素在硫酸銅誘導的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究將雄性水貂隨機分為:①空白對照組、②硫酸銅組、③姜辣素低、中、高劑量組,每組6只??瞻讓φ战M和硫酸銅組分別給以生理鹽水和1%西黃耆膠5ml·kg-1ig預處理;姜辣素低、中、高劑量組分
5、別用姜辣素50mg·kg-1ig、100mg·kg-1ig、200mg·kg-1ig預處理。除空白對照組外,其余水貂在預處理30min后給予硫酸銅40mg·kg-1ig,2h觀察期內記錄嘔吐潛伏期,干嘔,嘔吐次數。處死水貂,取極后區(qū)和回腸組織,一部分置4%甲醛中,備測SP、c-fos的免疫組化表達;另一部分置于-80℃冰箱中冷凍,備測NK1受體表達及cGMP、cAMP、IP3和DAG/DG的含量。
結果:1.姜辣素在阿撲嗎
6、啡誘導的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究表明:
皮下注射阿撲嗎啡后,阿撲嗎啡組6只水貂均發(fā)生嘔吐,嘔吐潛伏期短,干嘔及嘔吐次數均增加;而姜辣素低、中、高劑量組與阿撲嗎啡組比較,干嘔及嘔吐次數減少(26.5±2.1b,15.2±4.3b,9.2±11.7bvs31.7±12.5;3.7±0.5c,3.0±0.6b,2.0±0.9bvs4.7±0.8,bP<0.01,cP<0.05),嘔吐潛伏期延長(50.7±5.7minvs29.
7、3±3.8bmin,bP<0.01),并有量效關系。
免疫組化結果顯示:SP、c-fos免疫反應陽性產物呈現棕黃色顆粒,在阿撲嗎啡組極后區(qū)陽性顆粒最多,著色最深,隨姜辣素劑量增大,陽性反應顆粒減少,著色變淺,表達受到抑制。免疫組化陽性評分結果顯示,阿撲嗎啡組水貂腦組織極后區(qū)中SP、c-fos表達明顯增高,與空白對照組比較有差異(4.2±0.9avs0.7±0.5;4.5±1.2avs1.7±0.7,aP<0.01);姜辣素
8、低、中、高劑量組SP、c-fos表達水平與阿撲嗎啡組比較降低(2.8±0.8b,2.3±0.5c,1.5±0.6cvs4.2±0.9;3.8±1.7,2.8±0.7b,2.0±0.9cvs4.5±1.2,bP<0.05,cP<0.01)。
Western-blot檢測結果顯示:皮下注射阿撲嗎啡會引起水貂極后區(qū)NK1受體表達增高,姜辣素低、中、高劑量組均能抑制NK1受體表達,且隨劑量增加,抑制作用增強。半定量結果顯示:阿撲嗎
9、啡組NK1受體表達,與空白對照組比較有差異(0.70±0.08avs0.20±0.03,aP<0.01);姜辣素低、中、高劑量組NK1受體表達水平,與阿撲嗎啡組比較降低(0.46±0.04b,0.39±0.05b,0.27±0.03bvs0.70±0.08,bP<0.01)。
2.姜辣素在洛哌丁胺誘導的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究表明:
洛哌丁胺可成功復制水貂嘔吐模型,皮下注射洛哌丁胺后,洛哌丁胺組6只水貂均發(fā)
10、生嘔吐,嘔吐潛伏期短,干嘔及嘔吐次數均增加;而姜辣素具有明顯的抗嘔吐作用,姜辣素組水貂嘔吐潛伏期較洛哌丁胺組延長(45.2±12.7bminvs26.9±7.8min,bP<0.01)。0-2h觀察期內,姜辣素低、中、高劑量組干嘔和嘔吐次數較洛哌丁胺組顯著減少(30.5±4.3b,25.3±3.0b,20.0±2.5bvs51.7±13.2;4.5±1.0,3.7±0.5c,2.8±0.7bvs5.3±1.0,bP<0.01,cP<0.
11、05)。
免疫組化染色顯示,SP、c-fos免疫反應陽性產物在洛哌丁胺組極后區(qū)陽性顆粒最多,著色最深,而姜辣素組隨劑量增大,陽性反應顆粒減少,著色變淺。免疫組化陽性評分結果顯示,洛哌丁胺使水貂極后區(qū)SP及c-fos表達增加(3.3±0.5avs0.7±0.5;3.7±0.5avs0.3±0.5,aP<0.01)姜辣素低、中、高劑量組水貂極后區(qū)SP及c-fos表達顯著少于洛哌丁胺組(2.3±0.5b,1.7±0.5b,0.8
12、±0.4bvs3.3±0.5;3.2±0.7,2.7±0.5b,1.5±0.6bvs3.7±0.5,bP<0.01)。
Western-blot檢測結果顯示:與空白對照組比,洛哌丁胺組水貂極后區(qū)NK1受體表達增高(0.63±0.04avs0.16±0.04,aP<0.01);姜辣素低、中、高劑量組NK1受體表達水平與洛哌丁胺組比降低(0.39±0.03b,0.32±0.05b,0.24±0.06bvs0.63±0.04,b
13、P<0.01)。
3.姜辣素在硫酸銅誘導的水貂嘔吐模型抗嘔吐作用研究表明:
硫酸銅40mg·kg-1灌胃后水貂有明顯的干嘔和嘔吐反應。與硫酸銅組相比,姜辣素組水貂嘔吐潛伏期延長,干嘔及嘔吐次數減少(22.3±2.1b,18.5±1.4b,7.5±1.5bvs31.5±2.5;4.8±0.7c,4.0±0.6b,2.3±0.8bvs6.3±1.2bP<0.01,cP<0.05)。
免疫組化方法顯示
14、:SP免疫反應陽性產物在硫酸銅組回腸組織和極后區(qū)陽性顆粒最多,著色最深,而隨姜辣素劑量增大,陽性反應顆粒減少,著色變淺。免疫組化陽性評分結果顯示,硫酸銅組水貂回腸組織和極后區(qū)SP表達明顯增加(3.0±0.6avs0.7±0.5;2.5±0.5avs0.5±0.5,aP<0.01),而姜辣素低、中、高劑量組回腸及極后區(qū)SP表達水平,與硫酸銅組比較降低(2.3±0.5,1.5±0.5b,1.3±0.5bvs3.0±0.6;2.2±0.4,1
15、.3±0.5b,0.8±0.4bvs2.5±0.5,bP<0.01)。
免疫組化陽性評分結果顯示,硫酸銅組水貂回腸組織和極后區(qū)c-fos表達明顯增加(3.1±0.7avs0.7±0.5;2.8±0.8avs0.5±0.5,aP<0.01),而姜辣素低、中、高劑量組外周及中樞組織中c-fos表達水平,與硫酸銅組比較降低(2.5±0.5,1.7±0.5b,1.4±0.4bvs3.1±0.7;2.4±0.6,1.7±0.8b,1
16、.2±0.4bvs2.8±0.8,bP<0.01)。
Western-blot檢測結果顯示:硫酸銅組水貂回腸和極后區(qū)NK1受體表達明顯增高,與空白對照組比較有差異(0.73±0.03avs0.32±0.04;0.52±0.03avs0.29±0.02,aP<0.01);姜辣素低、中、高劑量組NK1受體表達水平,與硫酸銅組比較降低(0.55±0.03b,0.42±0.04b,0.32±0.04bvs0.73±0.03;0.4
17、7±0.03c,0.36±0.05b,0.31±0.05bvs0.52±0.03,bP<0.01,cP<0.05)。
酶聯免疫法實驗結果表明:硫酸銅組水貂回腸組織與極后區(qū)腦組織中cGMP含量有明顯降低,與空白對照組比較有差異(26.82±5.93avs42.37±10.84;25.60±7.44avs40.18±12.03,aP<0.01)。姜辣素低、中、高劑量組回腸與極后區(qū)cGMP含量較硫酸銅組均升高(35.43±6.2
18、6b,37.92±7.23b,40.50±7.25bvs26.82±5.93;32.62±8.55b,35.12±3.76b,39.48±5.93bvs25.60±7.44,bP<0.01)。與空白對照組比較,模型組的cAMP、IP3和DAG/DG沒有統(tǒng)計學意義,與硫酸銅組相比,姜辣素組cAMP、IP3和DAG/DG水平未見顯著差異。
結論:在水貂嘔吐模型,姜辣素可抑制阿撲嗎啡、洛哌丁胺、硫酸銅誘導的嘔吐,其機制與抑制了N
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