S1PR5在NK細胞介導移植物抗宿主病中的作用及其機制.pdf

1、研究背景:異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)技術已經成為治療血液系統(tǒng)疾病和某些實體腫瘤的重要方法之一。急性移植物抗宿主病（aGVHD）仍是影響移植成功率的重要因素。NK細胞是allo-HSCT后最早恢復免疫重建的細胞，目前的研究已經證實NK細胞可以抑制aGVHD的發(fā)生但不影響移植物抗腫瘤作用。鞘氨醇-1-磷酸受體5（S1PR5）是近年來發(fā)現(xiàn)的表達于NK細胞表面的一種G蛋白耦聯(lián)受體，能夠介導NK細胞由骨髓和淋巴結向其他組織的遷移，

2、進而發(fā)揮免疫學功能。前期的臨床研究發(fā)現(xiàn)allo-HSCT患者中S1PR5表達水平與aGVHD的發(fā)生率密切相關。
　　研究目的:主要通過動物試驗探討S1PR5對aGVHD的影響及相關作用機制。
　　研究方法及結果:
　?、賾肅RISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat andcas9 protein)技術構建S1PR5基因敲除(

3、S1PR5-/-)的小鼠;通過qPCR技術及蛋白免疫印跡雜交技術分別在RNA水平及蛋白水平上成功驗證了S1PR5-/-純合子小鼠中S1PR5被敲除。
　?、诹魇郊毎g分別檢測S1PR5-/-和WT C57BL/6小鼠體內骨髓、脾臟、淋巴結及外周血中淋巴細胞亞群分布，結果發(fā)現(xiàn)S1PR5-/-小鼠體內，骨髓、淋巴結中NK細胞比例較WT小鼠明顯增高，但是脾臟、外周血中NK細胞比例較WT小鼠明顯降低。
　　③分別將供者WT（對照組）

4、或者S1PR5-/-（實驗組）C57BL/6小鼠移植物（脾細胞+骨髓細胞）經尾靜脈注射入致死劑量照射后的受者BALB/c小鼠體內，建立aGVHD模型，隨訪小鼠體重、aGVHD評分及生存時間。移植后觀察60天，發(fā)現(xiàn)實驗組小鼠較對照組小鼠生存率明顯降低; aGVHD評分明顯升高;兩組體重減輕變化沒有統(tǒng)計學差異。
　?、芤浦埠蟮?天分別取受者小鼠的骨髓、脾臟、淋巴結及外周血，應用流式細胞術檢測不同部位淋巴細胞亞群分布。移植后第4天，實驗

5、組小鼠骨髓中NK細胞含量明顯高于對照組;而在脾臟、淋巴結及外周血中，兩組間的NK細胞含量沒有明顯差異。實驗組小鼠骨髓T細胞含量明顯低于對照組小鼠中T細胞量;在脾臟、淋巴結及外周血中，兩組間T細胞含量均沒有明顯差異。
　　⑤移植后第30天分別取出受者小鼠的骨髓、脾臟、淋巴結及外周血，應用流式細胞術檢測不同組織中淋巴細胞亞群分布。實驗組小鼠骨髓中NK細胞含量明顯高于對照組骨髓中NK細胞含量;在脾臟、淋巴結及外周血中，兩組NK細胞含量沒

6、有明顯差異。實驗組小鼠外周血中T細胞含量明顯高于對照組外周血中T細胞含量;在骨髓、脾臟及淋巴結中，兩組間T細胞含量沒有明顯差異。
　　研究結論:
　?、貱RISPR/Cas9技術是建立基因敲除小鼠模型有效而快捷的方法之一;
　?、赟1PR5影響NK細胞的在小鼠體內的分布;
　　③供者小鼠中S1PR5表達缺失能夠加重受者小鼠的aGVHD;
　?、?S1PR5表達缺失致使NK細胞由骨髓遷出受阻，外周循環(huán)中對aG