硫化氫預(yù)處理對(duì)肝纖維化大鼠肝臟缺血再灌注損傷的作用及其相關(guān)機(jī)制.pdf

1、目的:
　　探討硫化氫對(duì)肝纖維化大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用并初步研究其機(jī)制。
　　方法:
　　64只SD大鼠通過(guò)膽總管結(jié)扎法建立大鼠肝纖維化模型，從存活大鼠中隨機(jī)取32只大鼠隨機(jī)分為4組:包括①假手術(shù)組（Sham組），②肝臟缺血再灌注損傷組(HIRI組)，③NaHS預(yù)處理組(NaHS組)，④NaHS預(yù)處理+PI3K抑制劑組（LY294002組），通過(guò)Pringle法阻斷肝門30min及恢復(fù)灌注4h引發(fā)肝臟缺血再灌

2、注損傷。①Sham組:僅開(kāi)腹顯露肝蒂，不阻斷血流。②HIRI組:開(kāi)腹顯露肝蒂，應(yīng)用Pringle法行肝門阻斷，使肝臟缺血30min，后開(kāi)放肝門，使肝臟恢復(fù)灌注4h。③NaHS處理組于HIRI前30min經(jīng)腹腔注射NaHS42umol/kg，隨后處理同HIRI組。④LY294002組于HIRI前1h經(jīng)尾靜脈注射LY29400210umol/kg，于HIRI4h后處死大鼠，分別取血液及肝組織，測(cè)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素水平;測(cè)定肝

3、組織MDA水平、SOD水平;取左肝外葉組織，透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)自噬體形態(tài)及數(shù)量;取左肝外葉組織，制成10％組織勻漿。應(yīng)用WesternBlot技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞自噬特異性標(biāo)記蛋Beclin1、LC3B以及AKt蛋白表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1:肝纖維化大鼠動(dòng)物模型的建立:取各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清，檢測(cè)總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平，分別與假手術(shù)組之間進(jìn)行比較，檢測(cè)

4、發(fā)現(xiàn)結(jié)扎組TBIL、DBIL、AST、ALT較正常大鼠均顯著升高(p＜0.05)，肝組織切片Masson染色病理學(xué)鏡檢，結(jié)扎18天組大鼠大部分處于肝纖維化Ⅲ期階段。
　　2:生化指標(biāo)檢測(cè):與假手術(shù)對(duì)比，各組谷草轉(zhuǎn)氨酶水平均顯著升高(p＜0.05)，其中NaHS組及LY294002組較HIRI組損傷減輕(p＜0.05)，LY294002組相比NaHS組損傷加重(p＜0.05)。
　　3:MDA水平及SOD水平檢測(cè):在肝纖維化大

5、鼠缺血再灌注4h后，與假手術(shù)組對(duì)比，各組SOD水平均顯著降低(p＜0.05)，其中HIRI組降低最明顯，各組MDA水平均顯著升高(p＜0.05);NaHS組及LY294002組較HIRI組SOD水平高(p＜0.05)，MDA水平低(p＜0.05);LY294002組相比NaHS組SOD水平低(p＜0.05)，MDA水平高(p＜0.05)。
　　4:自噬指標(biāo)檢測(cè):1）自噬體的檢測(cè):與假手術(shù)組對(duì)比，電子顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)各組自噬體均較假手

6、術(shù)組增多，NaHS預(yù)處理組相比HIRI組自噬體數(shù)量較少，LY294002組相比NaHS預(yù)處理組自噬體數(shù)量增多;2）Beclin1、LC3B以及AKt蛋白的表達(dá)情況:與假手術(shù)組對(duì)比，各組Beclin1表達(dá)水平均升高(p＜0.05)，NaHS預(yù)處理組與HIRI組比較其Beclin1表達(dá)水平減低(p＜0.05)，LY294002干預(yù)組相比NaHS預(yù)處理組其Beclin1表達(dá)水平增高(p＜0.05);與假手術(shù)組相比，各組LC3B表達(dá)水平均升高(

7、P＜0.05)，NaHS預(yù)處理組與HIRI組比較其LC3B表達(dá)水平減低(p＜0.05)，LY294002干預(yù)組相比NaHS預(yù)處理組其LC3B表達(dá)水平增高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);與假手術(shù)組對(duì)比，HIRI組Akt蛋白表達(dá)水平?jīng)]有顯著差別(P＜0.05)，NaHS預(yù)處理組與HIRI組比較Akt蛋白表達(dá)水平升高(P＜0.05)，LY294002干預(yù)組相比NaHS預(yù)處理組其Akt表達(dá)水平降低，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05