桑椹花色苷的雙水相萃取、純化、鑒定及體外模擬胃腸消化的研究.pdf

1、桑椹(mulberry)屬于?？?Moraceae)桑屬(Morus)植物,為多年生桑科落葉喬木桑樹(shù)的成熟果穗。桑椹營(yíng)養(yǎng)豐富,富含多種人體所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),和沙棘、懸鉤子等一起被譽(yù)為“第三代水果”。桑椹果實(shí)中含有大量的花色苷類(lèi)色素,是一種良好的花色苷類(lèi)色素來(lái)源。雙水相萃取技術(shù)是一種高效而溫和的新型分離技術(shù),具有選擇性好、分離時(shí)間短、萃取效率高、成本低等傳統(tǒng)方法無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì),目前已被廣泛用于生物分子的分離和富集。目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)關(guān)于雙水相

2、萃取分離花色苷類(lèi)色素的報(bào)道。因此本文采用雙水相萃取桑椹花色苷,并對(duì)其進(jìn)行純化、鑒定及體外模擬胃腸消化的研究,為桑椹花色苷及天然色素的研究與應(yīng)用提供基礎(chǔ)。本論文分為四個(gè)部分,主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　 第一部分不同品種桑椹的成分分析及其抗氧化活性測(cè)定
　　 對(duì)八種桑椹的成分和抗氧化活性進(jìn)行了分析和測(cè)定。結(jié)果表明,其成分和抗氧化活性有明顯的差異。水分含量為70.0％～87.4％,粗蛋白含量為1.62％～5.54％,粗脂肪

3、含量為0.23％～2.33％,其脂肪酸主要為亞油酸(C18:2)和棕櫚酸(C16:0),分別占總脂肪酸相對(duì)含量的26.40％～74.77％,9.29％～22.26％。桑椹富含鉀、鈣、磷、鈉、鎂、鐵、鋅、銅、錳、硒等多種微量元素,其中鉀的含量最高,為521.4～1718.6 mg／100g干重(DW)。桑椹的總花色苷含量為66.00～193.00 mg／100g鮮重(FW)；總酚含量為56.32～246.0 GAC mg／100g FW；

4、總黃酮含量為40.94～150.32 Ru mg／100g FW,其中綠椹子不含有花色苷和黃酮；總糖含量為1281.72～5755.60 Glu mg／100g FW。八種桑椹均具有較好的清除DPPH和OH自由基能力,其抗氧化活性與總酚含量具有較好的相關(guān)性,而與總花色苷含量的相關(guān)性次之。桑種Morus atropurpurea Roxb.顯示出相對(duì)較好的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和較高的抗氧化能力,因而選取用于下一步研究。
　　 第二部分雙水相萃

5、取桑椹花色苷的工藝研究
　　 以桑椹花色苷回收率和糖去除率為指標(biāo),考察了雙水相體系的組成、乙醇濃度、硫酸銨濃度、樣品濃度、pH、溫度對(duì)桑椹花色苷和糖在兩相中差向分配行為的影響,確定了雙水相萃取的最佳工藝條件,并將雙水相萃取法與傳統(tǒng)的酸性乙醇提取法進(jìn)行比較。結(jié)果表明,雙水相體系組成為乙醇濃度為30％、硫酸銨濃度為20％、桑椹汁濃度為10％以及水,在pH4.5和萃取溫度35℃下,桑椹花色苷的回收率為85.1％,糖去除率為89.5％。

6、多次雙水相萃取表明一次萃取既能分離大部分花色苷又能除去將近90％的游離糖。雙水相萃取法得到的花色苷含量比傳統(tǒng)酸性溶劑提取法提高了1.5倍,該方法糖去除率高,且操作簡(jiǎn)單,分離時(shí)間短,在天然花色苷類(lèi)色素的分離方面具有較好的應(yīng)用前景。
　　 第三部分桑椹花色苷的純化及其鑒定
　　 采用Sephadex LH-20對(duì)雙水相萃取的粗色素進(jìn)行純化,共得到2個(gè)組分,其中組分1為主要的純化產(chǎn)物。采用HPLC-ESI-MS／MS對(duì)粗色素、

7、純化組分1以及組分2進(jìn)行了鑒定,粗色素中共發(fā)現(xiàn)有25種花色苷。組分1主要含有5種花色苷,分別為矢車(chē)菊素-3-葡萄糖苷、矢車(chē)菊素-3-蕓香糖苷、芍藥花素-3-阿拉伯糖、天竺葵素-3-葡萄糖苷、芍藥花素-3-鼠李糖-5-槐糖苷。而組分2則發(fā)現(xiàn)主要成分為一些槲皮素和山奈酚類(lèi)黃酮物質(zhì),如:山奈酚-3-乙酰木糖苷、槲皮素-3-葡萄糖苷、槲皮素-3-蕓香糖苷、槲皮素-3,5-阿拉伯二糖。
　　 第四部分桑椹花色苷的體外模擬胃腸消化研究

8、>　　 采用體外消化透析法分別對(duì)桑椹粗色素和組分1進(jìn)行模擬胃腸消化實(shí)驗(yàn),并測(cè)定其消化產(chǎn)物的總花色苷和總酚的回收率以及抗氧化活性。結(jié)果表明,花色苷在模擬胃液環(huán)境中能穩(wěn)定存在,花色苷的回收接近100％；經(jīng)腸消化后,總花色苷回收率均很低,粗色素在透析液和滯留液的回收率分別為4.95％和34.67％;而組分1的則分別僅為0.34％和4.58％。粗色素和組分1經(jīng)胃消化后的總酚回收率為66.17％和60.38％,而經(jīng)腸消化后總酚回收率分別為53.