重組腺相關病毒2-8制備系統的建立及間充質干細胞對卵巢癌趨化作用的研究.pdf

1、腺相關病毒8(adeno-associate.viru.8，AAV8)是2002年在猿猴中分離得到的一類新型腺相關病毒載體，相對常用的AAV2具有更高的感染效率，更穩(wěn)定持久的表達時間，且免疫原性更低，感染后表達迅速。2004年Blood報道AAV8在動物實驗中已被成功用于血友病A的基因治療。2007年，闡明了AAV8的晶體結構。目前AAV8的研究受到了各國科學家的重視，應用AAV8來治療各種惡性腫瘤也成了基因治療領域研究的一個新熱點。然

2、而，目前對于AAV8的研究還不成熟，AAV8的制備相對AAV2要繁瑣和困難，只是在幾家國外實驗室做得比較出色，在國內做的也很不成熟，因而大大限制了AAV8的推廣和利用。我們想通過這個課題來研究并建立相對較好的重組腺相關病毒2/8(recombinantadeno-associate.viru.2/8，rAAV2/8)的制備系統。
　　 另外，骨髓間充質干細胞(bon.marrow-mesenchyma.ste.cell，MSC)

3、，是存在于骨髓中的非造血性干細胞，近年來的體內外實驗表明MSC能高度靶向遷移到腫瘤組織，而且在臨床上MSC已成功應用于造血移植，具有較好的安全性，因而MSC在腫瘤的靶向性細胞治療的應用上引起了廣泛的關注，成為非常有前景的一類干細胞治療載體。2008年的Ste.cells和Gen.therapy上分別報道了利用MSC治療肺轉移性的黑素瘤和前列腺癌。為此，我們做了MSC對卵巢癌體內趨化作用的實驗，想在下一步實驗中聯合rAAV2/8和MSC來

4、做靶向基因治療的研究。
　　 以此為理論基礎，我們構建并鑒定了包裝rAAV2/8的三質粒pSH3-D(輔助質粒)、p5E18-VD286(包裝質粒)和AAV-neo-eGFP(載體質粒)，穩(wěn)定和優(yōu)化了三質粒共轉染的聚乙烯亞胺(PEI)沉淀法，在HEK293細胞系中成功重組包裝出了攜帶有eGFP基因的rAAV2/8，建立了較為穩(wěn)定的rAAV2/8病毒的制備系統。在MSC趨化卵巢癌的實驗中，我們首先用10只Balb/c裸鼠注射人SK