IL-13誘導(dǎo)白血病細(xì)胞系Dami和HEL細(xì)胞STAT6磷酸化.pdf

1、研究重組人白細(xì)胞介素13(Recombinant human interleukin 13，rhIL-13)誘導(dǎo)白血病細(xì)胞系Dami和HEL(human erythrol eukemia，人類紅白血病)STAT6(Signal transducers and activators of transcription，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子)磷酸化，部分闡明IL-13的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 方法 1.細(xì)胞培養(yǎng)：Dami、HEL細(xì)胞

2、用含lO％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，37℃，5％CO<,2>。取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為8×10<'8>～1×lO<'9>／L，在細(xì)胞因子誘導(dǎo)前先經(jīng)無血清培養(yǎng)20h。 2.總RNA提取：以rhIL-13(100μg／L)分別誘導(dǎo)Dami、HEL細(xì)胞不同時(shí)間，提取各組總RNA，通過RNA電泳判斷其是否符合實(shí)驗(yàn)要求。 3.RT-PCR方法：檢測(cè)rhIL-13作用Dami、HEL細(xì)胞0、4h、12h，I

3、L-4受體α(IL-4Rα)的mRNA表達(dá)。 4.Western blot方法：取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的Dami、HEL細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為8×10<'8>～1×10<'9>／L，經(jīng)20h的無血清培養(yǎng)后，用rhIL-13(100μg／L)分別作用0、lh、2h、4h、8h，RIPA buffer裂解細(xì)胞提取蛋白質(zhì)，用Western blot方法檢測(cè)總STAT6蛋白以及p-STAT6(phosphorylated STAT6，磷酸化STA

4、T6)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 1.Dami細(xì)胞表達(dá)STAT6蛋白，rhIL-13誘導(dǎo)2h， STAT6蛋白磷酸化，4h去磷酸化。 2．HEL細(xì)胞表達(dá)STAT6蛋白，rhIL-13誘導(dǎo)1h，STAT6蛋白磷酸化，4h去磷酸化。 3．Dami細(xì)胞表達(dá)IL-4R α mRNA。 4．HEL細(xì)胞表達(dá)IL-4R α mRNA。 結(jié)論 1．白血病細(xì)胞系HEL和Dami表達(dá)STAT6蛋白。