交替氧化酶對(duì)白念珠菌生物膜形成的影響.pdf

1、目的：探討白念珠菌呼吸途徑對(duì)其生物膜形成的影響。
　　方法：
　　1、通過(guò)XTT法檢測(cè)加入呼吸鏈阻滯劑的白念珠菌所形成的生物膜的代謝活性。
　　2、通過(guò)熒光顯微鏡和XTT法觀察白念珠菌GOA1基因缺失株（GOA31）、GOA1基因恢復(fù)株（GOA32）、AOX1a基因缺失株（AOX1）以及AOX1b基因缺失株（AOX2）的生物膜形成情況。
　　3、通過(guò)RT-PCR的方法檢測(cè)白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX

2、1以及AOX2生物膜形成細(xì)胞黏附相關(guān)基因BCR1、ALS1、ALS3、ECE1以及HWP1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1、XTT法檢測(cè)不同呼吸鏈阻滯劑對(duì)白念珠菌生物膜的影響：分別加入經(jīng)典線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、復(fù)合體Ⅱ、復(fù)合體Ⅲ、復(fù)合體Ⅳ和交替氧化酶阻滯劑后白念珠菌形成的生物膜活性與空白對(duì)照組形成的生物膜活性比值分別為0.860±0.062（P＞0.05），1.034±0.052（P＞0.05），2.396±0.900（P＜

3、0.01），1.348±0.167（P＜0.01），0.238±0.010（P＜0.01）。
　　2、XTT法檢測(cè)白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX1和AOX2形成的生物膜代謝活性：GOA31、GOA32、AOX1以及AOX2形成的生物膜活性與SC5314形成的生物膜活性比值分別為0.813±0.172（P＞0.05）、1.067±0.075（P＞0.05）、0.223±0.091（P＜0.05）、1.133±0.110（

4、P＞0.05）。
　　3、倒置熒光顯微鏡下觀察白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX1和AOX2所形成的生物膜形態(tài)：GOA31、GOA32以及AOX2形成的生物膜形態(tài)較野生株SC5314無(wú)明顯區(qū)別，均含豐富的細(xì)胞外基質(zhì)及菌絲相細(xì)胞，而AOX1形成的生物膜量明顯減少，僅可見(jiàn)散在念珠菌孢子，缺乏菌絲相細(xì)胞。
　　4、RT-PCR檢測(cè)白念珠菌菌株GOA31、GOA32、AOX1和AOX2生物膜形成細(xì)胞黏附相關(guān)基因的表達(dá)水平：G

5、OA31、GOA32和AOX2中基因ALS1、ALS3、ECE1、BCR1和HWP1表達(dá)水平與SC5314相比，均無(wú)明顯差異。然而在AOX1中，基因BCR1和ALS3表達(dá)水平無(wú)明顯變化，基因ALS1和ECE1表達(dá)水平降低，基因HWP1表達(dá)水平增高。
　　結(jié)論：
　　1、交替氧化酶呼吸途徑參與白念珠菌生物膜形成,而經(jīng)典線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ和復(fù)合體Ⅱ?qū)Π啄钪榫锬ば纬蔁o(wú)明顯影響。
　　2、交替氧化酶基因AOX1a對(duì)白念珠