結(jié)扎冠狀動(dòng)脈對大鼠心肌組織NK-,1-受體、β-,1-腎上腺素能受體表達(dá)的影響及P物質(zhì)、降鈣素基因相關(guān)肽mRNA定位的研究.pdf

1、研究目的：觀察P物質(zhì)(SP)、降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)mRNA在大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)、脊髓、心臟和肺臟的分布：大鼠冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后不同時(shí)點(diǎn)NK1受體和β1受體在心臟的表達(dá)變化，以及硬膜外藥物干預(yù)效應(yīng)。探討神經(jīng)肽在神經(jīng)源性反應(yīng)和器官損傷/保護(hù)中的作用。 研究背景：已有的相關(guān)研究表明，SP、CGRP參與機(jī)體對心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。在發(fā)生急性心肌缺血時(shí)，交感一腎上腺素能活性明顯增高，且心肌組織內(nèi)上述活性物質(zhì)的含量均有所增加，提示SP

2、、CGRP參與并影響急性心肌缺血的病理變化過程，目前其分子作用機(jī)制還不明確。 研究內(nèi)容及方法： 第一部分：急性心肌缺血大鼠PPT-A mRNA、CGRP mRNA的表達(dá) 以及與內(nèi)臟神經(jīng)分布的關(guān)系實(shí)驗(yàn)選用雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組：(1)手術(shù)對照組(Sham group，Sham組)，只開胸暴露心臟，不結(jié)扎冠脈；(2)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈組(Coronary artery occlusion group,CAO組)，單純扎閉

3、冠狀動(dòng)脈左前降支。每組均為6只動(dòng)物。采用原位分子雜交技術(shù)觀察結(jié)扎冠脈后3h大鼠DRG、脊髓、心臟和肺臟組織PPT-A mRNA、CGRP mRNA的表達(dá)情況；并應(yīng)用銀染法檢測心臟、肺臟、腸道、脾臟神經(jīng)組織的分布。 第二部分：急性心肌缺血大鼠心肌組織NK1受體和β1受體的表達(dá) 動(dòng)物分組同第一部分，每組又分1h、3h和6h三個(gè)時(shí)點(diǎn)(n=6)。采用免疫組化方法觀察并分析結(jié)扎冠脈后不同時(shí)點(diǎn)大鼠心肌組織NK1和β1受體的分布規(guī)律及

4、表達(dá)變化；并在受體表達(dá)變化最強(qiáng)時(shí)點(diǎn)，應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡(Westem blot)技術(shù)半定量檢測心肌組織該受體的蛋白水平。 第三部分：硬膜外痛覺干預(yù)對心肌組織NK1受體和β1受體表達(dá)的影響 根據(jù)第二部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取CAO后NK1受體和β1受體表達(dá)變化最強(qiáng)時(shí)點(diǎn)進(jìn)行藥物干預(yù)研究。動(dòng)物隨機(jī)分為四組(n=6)：(1)手術(shù)對照組(Sham組)；(2)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈組(CAO組)；(3)羅哌卡因硬膜外阻滯組(Epidural Ropi

5、vacaine group，E-R組)；(4)嗎啡硬膜外鎮(zhèn)痛組(Epidural Morphine group，E-M組)。后兩組分別在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前15min經(jīng)胸段硬膜外給予1％羅哌卡因120μg.kg-1或3.75％嗎啡60μg.kg-1。采用免疫組化、Western blot技術(shù)從受體蛋白水平對比分析藥物的硬膜外干預(yù)效應(yīng)。 結(jié)果： l、急性心肌缺血大鼠PPT-AmRNA、CGRP mRNA主要分布于DRG小直徑神經(jīng)

6、元和脊髓背角，在心臟、肺臟毛細(xì)血管壁和氣道上皮下基底部均有表達(dá)；神經(jīng)組織銀染法觀察到內(nèi)臟局部存在豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。 2、CAO 3h和6h組大鼠心臟缺血區(qū)與非缺血區(qū)NK1受體較對照組高表達(dá)(P<0.05)。 3、與對照組相比，CAO組大鼠心肌組織β1受體的表達(dá)顯著增高(P<0.01)，1小時(shí)即達(dá)峰值。 4、在羅哌卡因或嗎啡胸段硬膜外干預(yù)下，缺血心肌組織NK1受體和β1受體蛋白水平較單純CAO組降低(P<0.05)。

7、 結(jié)論： 1、原位雜交結(jié)果提示：PPT-A mRNA、CGRP mRNA分布規(guī)律相似；急性心肌缺血時(shí)心肌細(xì)胞、肺實(shí)質(zhì)細(xì)胞SP、CGRP自身合成較弱；與免疫組化結(jié)果比較，在某些部位SP或CGRP與其mRNA的分布存在不一致性。 2、SP、CGRP及其mRNA在心臟、肺臟中的分布規(guī)律，與銀染實(shí)驗(yàn)觀察到的神經(jīng)分布大致相似。組織器官局部豐富的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)及其釋放或合成的神經(jīng)肽，可能參與了局部效應(yīng)因子之間的對話和器官功能的調(diào)節(jié)

8、過程。 3、急性心肌缺血誘發(fā)大鼠心肌組織NK1受體表達(dá)上調(diào)，提示：NK1受體參與了急性心肌缺血的神經(jīng)源性反應(yīng)，且受體的改變可能影響和調(diào)節(jié)SP對靶細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)。 4、急性心肌缺血誘導(dǎo)大鼠心肌組織β1受體密度迅速顯著上調(diào)，使之對組織局部高濃度的兒茶酚胺反應(yīng)性增強(qiáng)，這種變化參與了缺血心肌損傷的病理生理過程。 5、羅哌卡因或嗎啡胸段硬膜外痛覺干預(yù)可在一定程度上抑制急性心肌缺血大鼠心肌組織NK1受體和β1受體的過度表達(dá)