膝關(guān)節(jié)軟骨受創(chuàng)傷后和髕下脂肪墊之間相互作用關(guān)系的研究.pdf

1、目的:為更好地研究創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎的機(jī)理，我們需要考慮周邊組織對(duì)軟骨組織代謝的影響。髕下脂肪墊作為關(guān)節(jié)囊內(nèi)，滑膜外的脂肪組織，過去僅被認(rèn)為起著機(jī)械緩沖作用，其對(duì)軟骨代謝的生物學(xué)作用尚不清楚。這里我們將建立基于彈簧的定量應(yīng)力撞擊模型來模擬創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎疾病中的創(chuàng)傷軟骨，然后觀察創(chuàng)傷軟骨早期分泌的促炎癥因子及其他指標(biāo)的變化，進(jìn)而探討髕下脂肪墊和創(chuàng)傷軟骨之間的相互作用。
　　方法:采用基于彈簧胡克定律的模型，制造了定量應(yīng)力的軟骨創(chuàng)傷模型，

2、然后分析牛膝關(guān)節(jié)軟骨對(duì)不同應(yīng)力的反應(yīng)，確定合適的撞擊應(yīng)力值;再通過分析不同時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)傷軟骨的細(xì)胞死亡率、GAG丟失、PGE2的釋放、一氧化氮的釋放等指標(biāo)，確定最佳的研究軟骨早期創(chuàng)傷反應(yīng)的時(shí)間點(diǎn);然后將經(jīng)過髕下脂肪墊處理的溶液用于培養(yǎng)創(chuàng)傷軟骨，分析創(chuàng)傷軟骨對(duì)髕下脂肪墊的反應(yīng);最后，收集創(chuàng)傷軟骨的分泌物質(zhì)用于培養(yǎng)髕下脂肪墊來源的脂肪干細(xì)胞及脂肪細(xì)胞，分析相關(guān)脂肪因子及促炎因子的表達(dá)。
　　結(jié)果:通過我們?cè)O(shè)計(jì)的裝置，軟骨在受到不同應(yīng)力時(shí)，

3、軟骨細(xì)胞死亡率、PGE2釋放、一氧化氮釋放及GAG降解等生物學(xué)反應(yīng)會(huì)有不同，最終我們選取36MPa用于下一步實(shí)驗(yàn);通過分析不同時(shí)間點(diǎn)各指標(biāo)的釋放，我們確定48小時(shí)為合適的研究早期軟骨降解的時(shí)間點(diǎn)，且分析出TNF-α而非IL-1β或IL-6為創(chuàng)傷后由軟骨自身釋放的主要促炎細(xì)胞因子。通過使用髕下脂肪墊組織培養(yǎng)過的培養(yǎng)液培養(yǎng)創(chuàng)傷軟骨發(fā)現(xiàn)，髕下脂肪墊僅對(duì)創(chuàng)傷軟骨有進(jìn)一步降解的作用，表明在正常生理狀態(tài)下髕下脂肪墊起著穩(wěn)定軟骨代謝平衡作用，在軟骨創(chuàng)

4、傷后暴露了一些受體或信號(hào)，促使髕下脂肪墊起反應(yīng)而進(jìn)一步促進(jìn)軟骨的降解，我們分析認(rèn)為是IL-6通過升高iNOS并降低TIMP1/2/3的表達(dá)來發(fā)揮作用。進(jìn)一步，我們分析了創(chuàng)傷軟骨釋放的信號(hào)對(duì)髕下脂肪墊主要兩類細(xì)胞ADSC及DFAT作用發(fā)現(xiàn)，其會(huì)促進(jìn)ADSC及DFAT的IL-6高表達(dá)，而不影響其他脂肪因子及促炎因子。
　　結(jié)論:我們?cè)O(shè)計(jì)的定量軟骨創(chuàng)傷模型能較好模擬軟骨創(chuàng)傷后反應(yīng)，可廣泛用于創(chuàng)傷性骨關(guān)節(jié)炎的研究，我們認(rèn)為促炎因子TNF-