組織工程方法體外培養(yǎng)角膜緣上皮細胞的實驗研究.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)人角膜緣上皮細胞，了解培養(yǎng)細胞的生長情況。分別采用去上皮羊膜和生物羊膜為載體培養(yǎng)人角膜緣上皮細胞28d，觀察細胞在不同載體上的生長，分層及與載體的連接情況。探討以生物羊膜為載體培養(yǎng)角膜緣上皮細胞的可行性。 方法：通過倒置顯微鏡觀察組織塊貼壁培養(yǎng)法和酶消化法培養(yǎng)角膜緣上皮細胞的生長情況，選用K3抗體和p63抗體運用免疫組化方法鑒定培養(yǎng)細胞中是否含有具有增殖潛力的角膜緣干細胞。運用組織工程方法分別采用去上皮羊膜及生物羊

2、膜為載體，使用組織塊貼壁培養(yǎng)法及酶消化法培養(yǎng)角膜緣上皮細胞，通過培養(yǎng)細胞蘇木素染色及組織切片HE染色觀察細胞的生長及分層，通過透射電鏡觀察培養(yǎng)細胞與載體的連接。 結(jié)果：組織塊貼壁培養(yǎng)法及酶消化法均能培養(yǎng)角膜緣上皮細胞，組織塊貼壁法培養(yǎng)細胞的成功率較高。培養(yǎng)14d含有K3陰性，p63陽性的細胞。采用去上皮羊膜及生物羊膜培養(yǎng)角膜緣上皮細胞均可以獲得3～4層形態(tài)良好的上皮層樣結(jié)構(gòu)，培養(yǎng)28d通過透射電鏡可以觀察到培養(yǎng)細胞與生物羊膜表面