鷹嘴豆糖醇的分離純化、腸道微生態(tài)調(diào)節(jié)、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能研究.pdf

1、鷹嘴豆糖醇是一種存在于鷹嘴豆中的低聚三糖，是肌醇的C6位以α-(1→6)糖苷鍵結(jié)合2分子半乳糖而形成的，2個(gè)半乳糖的之間也是通過(guò)α-(1→6)糖苷鍵進(jìn)行連接。鷹嘴豆糖醇的來(lái)源是鷹嘴豆，鷹嘴豆中有10％左右的碳水化合物為鷹嘴豆糖醇。本研究目的在于從鷹嘴豆中提取鷹嘴豆糖醇（純度＞95％），并且對(duì)鷹嘴豆糖醇的調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果如下:
　　1、鷹嘴豆糖醇的分離純化
　　首先，把鷹嘴豆糖醇中的可溶性糖通

2、過(guò)重量比為1∶1的活性炭-硅藻土中壓柱分離，通過(guò)高效液相色譜分析鷹嘴豆中可溶性糖組成。結(jié)果表明，鷹嘴豆中主要含有果糖、蔗糖、棉籽糖、鷹嘴豆糖醇及水蘇糖。最終得到純度為95.17％的鷹嘴豆糖醇。
　　2、鷹嘴豆糖醇調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)能力的研究
　　采用體外厭氧糞樣混合培養(yǎng)的方式對(duì)鷹嘴豆糖醇進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，測(cè)定鷹嘴豆糖醇對(duì)腸道內(nèi)菌群組成的影響?？瞻讓?duì)照組是不添加任何碳源的培養(yǎng)基，陽(yáng)性對(duì)照組為低聚果糖。使用FISH技術(shù)對(duì)不同培養(yǎng)時(shí)間的有

3、益菌群、有害菌群以及總菌群的數(shù)量變化進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，鷹嘴豆糖醇對(duì)雙歧桿菌、乳酸菌都有較好的增殖作用，而對(duì)擬桿菌、梭狀菌的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，但是鷹嘴豆糖醇對(duì)總菌群的數(shù)量沒(méi)有顯著影響，說(shuō)明鷹嘴豆糖醇的益生作用在于調(diào)節(jié)腸道內(nèi)菌群組成，增加有益菌，抑制有害菌。此外通過(guò)HPLC技術(shù)對(duì)發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的各種SCFA含量的變化進(jìn)行測(cè)定，厭氧發(fā)酵24 h后，鷹嘴豆糖醇在發(fā)酵過(guò)程中生成了一定量的甲酸、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸，總短鏈脂肪酸的量較高，都

4、高于對(duì)照。
　　3、鷹嘴豆糖醇抗腫瘤活性研究
　　采用MTT法測(cè)定鷹嘴豆糖醇對(duì)HGC-27的抑制作用，培養(yǎng)時(shí)間為24h時(shí)，除了最高濃度樣品的抑制率在35％，其余各濃度樣品的抑制率均低于20％，這表明這幾種濃度的鷹嘴豆糖醇對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性。培養(yǎng)時(shí)間為48h時(shí)，各濃度樣品的抑制率都明顯高于培養(yǎng)時(shí)間為24h時(shí)的抑制率;同樣，當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為72h時(shí)，各濃度樣品的抑制率也明顯高于培養(yǎng)時(shí)間為48h時(shí)的抑制率，且最高抑制率達(dá)到82％。因此，表

5、明鷹嘴豆糖醇對(duì)胃癌細(xì)胞HGC-27有明顯抑制作用。
　　4、鷹嘴豆糖醇免疫調(diào)節(jié)活性的研究
　　通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)和小鼠免疫抑制模型試驗(yàn)對(duì)鷹嘴豆糖醇的免疫調(diào)節(jié)功能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
　　采用腹腔注射Cy建立小鼠動(dòng)物免疫抑制模型，結(jié)果顯示Cy對(duì)各項(xiàng)免疫指標(biāo)均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，表明小鼠免疫抑制模型造模成功。通過(guò)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠模型研究鷹嘴豆糖醇的體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)活性。結(jié)果顯示，鷹嘴豆糖醇能夠拮抗環(huán)磷酰胺引起的小鼠脾臟

6、萎縮，提高免疫抑制小鼠脾臟中的溶菌酶活性和血清中溶血素水平，還可以提高免疫抑制小鼠T淋巴細(xì)胞的免疫活性。這些結(jié)果表明，鷹嘴豆糖醇不僅能夠提高免疫抑制小鼠的非特異性免疫能力，還可以提高其特異性免疫能力。為鷹嘴豆的充分利用建立了較為堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　使用腹腔巨噬細(xì)胞系RAW264.7研究鷹嘴豆糖醇的體外免疫調(diào)節(jié)能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:鷹嘴豆糖醇在一定濃度范圍能有效的促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞的增殖;鷹嘴豆糖醇能夠激活RAW264.7巨噬細(xì)胞