生物鐘基因CLOCK促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的細(xì)胞增殖和遷移.pdf

1、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生論文博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：1 0 0 2 3學(xué) 號(hào)：B 2 0 1 0 0 0 5 0 3 2生物鐘基因C L O C K 促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的細(xì)胞增殖和遷移所 院 ： 基礎(chǔ)學(xué)院姓 名 ： 李愛花指導(dǎo)教師： 彭小忠教授導(dǎo)師小組： 強(qiáng)伯勤教授袁建剛教授彭小忠教授學(xué)科專業(yè)： 生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向： 神經(jīng)發(fā)育與疾病的分子機(jī)理完成日期： 2 0 1 3 年6 月北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士研究生論文6 ．4 酶切產(chǎn)物回收???

2、?????????????????????2 56 ．5 連接????????????????????????????．2 56 ．6 轉(zhuǎn)化??????????????????????????????2 56 ．7 接菌????????????????????????????．2 66 ．8 質(zhì)粒抽提???????????????????????????2 66 ．9 酶切鑒定??????????????????????????．2 6

3、6 ．1 0 測(cè)序及結(jié)果分析???????????????????????2 67 ．細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染???????????????????????????2 77 ．1 細(xì)胞培養(yǎng)及傳代???????????????????????．．2 77 ．2 轉(zhuǎn)染??????????????????????????????2 78 ．M T T ??????????????????????????????????????????．2 88 ．1

4、原理????????????????????????????．2 88 ．2M T T 溶液的配制???????????????????????．2 88 ．3 操作步驟??????????????????????????．2 89 ．克隆形成實(shí)驗(yàn)???????????????????????????一2 81 0 ．T R A N S W E L L 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)?????????????????????2 910 ．1 實(shí)驗(yàn)原理??

5、????????????????????????2 910 ．2 實(shí)驗(yàn)步驟??????????????????????????2 911 ．細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)???????????????????????????3 0l1 ．1 實(shí)驗(yàn)原理：?????????????????????????3 011 ．2 實(shí)驗(yàn)步驟：?????????????????????????3 01 2 ．熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)?????????????????????

6、??3 01 2 ．1 原理????????????????????????????3 01 2 ．2 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備??????????????????????．．3 01 2 ．3 熒光素酶基因活性檢測(cè)???????????????????一3 113 ．?dāng)?shù)據(jù)處理和分析??????????????????????????3 1結(jié) 果??????????????????????????????????????????．3 21 ．膠質(zhì)

7、瘤組織和膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中C L O C K 蛋白表達(dá)檢測(cè)??????????3 22 ．C L O C K 對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)的影響????????????????3 43 ．C L O C K 對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移的影響????????????????3 74 ．m i R ．1 2 4 在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中對(duì)C L O C K 的靶向作用檢測(cè)??????????3 85 ．M i R ．12 4 和C L O C K 膠質(zhì)瘤細(xì)胞中N