丙戊酸鈉對急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株Jurkat及骨髓瘤細(xì)胞株U266增殖抑制作用及調(diào)控組蛋白乙?；揎椀难芯?pdf

1、目的：研究丙戊酸鈉(valproic acid sodium，VPA)在體外對Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞增殖抑制作用及對細(xì)胞周期的影響；觀察VPA對組蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及組蛋白乙?；揎椪{(diào)控的影響，初步探討白血病及骨髓瘤的發(fā)生、發(fā)展與表觀遺傳學(xué)之間的聯(lián)系，從而進(jìn)一步闡明白血病及骨髓瘤發(fā)生、發(fā)展的可能機(jī)制。觀察VPA對Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞的促凋亡作用及調(diào)節(jié)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平，并探討促凋亡的可能途徑。另外進(jìn)一步研究

2、VPA對原代細(xì)胞的增殖抑制作用及調(diào)控組蛋白乙?；揎?，進(jìn)而誘導(dǎo)相關(guān)基因的重新表達(dá)。
　　 方法：采用CCK-8法檢測VPA對Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞增殖的抑制作用；光鏡下觀察細(xì)胞增殖及克隆抑制情況；Hoechst33258熒光染色，DNA凝膠電泳觀察細(xì)胞凋亡情況；應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測VPA作用前后Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的變化情況；半定量RT-PCR檢測VPA作用前后Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞中組蛋白

3、去乙?；?(HDAC1)、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivinmRNA的表達(dá)變化；Western blot方法檢測VPA作用前后HDAC1、組蛋白H3、H4乙?；郊癱aspase-3、caspase-9蛋白的表達(dá)情況。同樣應(yīng)用CCK-8法檢測VPA對原代細(xì)胞增殖的抑制作用，用RT-PCR法檢測VPA作用前后原代細(xì)胞HDAC1、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivin

4、mRNA表達(dá)的變化，用Western blot方法檢測VPA作用前后原代細(xì)胞HDAC1、組蛋白H3、H4乙?；鞍姿降淖兓?。
　　 結(jié)果：(1)VPA對Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞的增殖抑制作用呈時(shí)間-濃度依賴性；光鏡下觀察可見藥物作用后細(xì)胞增殖受抑制及克隆形成抑制。(2)VPA處理Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞48h后，細(xì)胞周期檢測顯示G0/G1期比例增高，S期比例下降，細(xì)胞被阻滯在G0/G1期。(3)與未處理組相比，VP

5、A作用Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表達(dá)減弱，而組蛋白H3、H4乙?；鞍姿奖磉_(dá)增加。(4)與未處理組相比，VPA作用Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞48h后Hoechst33258熒光染色可見細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞核致密濃染；DNA凝膠電泳可見典型的DNA梯形條帶；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率增加。(5)與未處理組相比，VPA作用Jurkat細(xì)胞及U266細(xì)胞48h后p21waf1waf1/cip1、p

6、27kip1mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，而c-myc、survivin mRNA的表達(dá)減弱，procaspase-3、procaspase-9蛋白表達(dá)也降低。(6)VPA作用原代ALL細(xì)胞后，可見細(xì)胞增殖生長受抑制，呈時(shí)間-濃度依賴性；VPA作用48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表達(dá)減弱，而組蛋白H3、H4乙?；鞍姿奖磉_(dá)增加；p21waf1/cip1、p27kip1mRNA的表達(dá)增強(qiáng)，而c-myc、survivin mRNA的表達(dá)減弱