去甲斑蝥素對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266增殖及凋亡的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：隨著社會(huì)老齡化的到來(lái)及診斷技術(shù)的提高，多發(fā)性骨髓瘤在人群中的發(fā)病率呈現(xiàn)增長(zhǎng)的趨勢(shì)，且發(fā)病趨向年輕化，所以多發(fā)性骨髓瘤的治療越來(lái)越引起血液學(xué)醫(yī)生的重視。多發(fā)性骨髓瘤是來(lái)源于漿細(xì)胞系的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為血液、免疫、骨骼及腎臟等方面的改變，發(fā)病多為60歲以上的老年人，傳統(tǒng)化療的副作用較大且緩解率低，病人耐受力較差，總生存期短。
　　 目前，臨床已將去甲斑蝥素（norcantharidin NCTD）廣泛應(yīng)用于肝癌、

2、食管癌等實(shí)體瘤化療的輔助治療，收到了喜人的效果，也吸引了許多研究工作者對(duì)其抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行深入細(xì)致的研究，并取得了相當(dāng)不錯(cuò)的成果這些研究成果一方面為癌癥治療的臨床用藥提供了理論依據(jù)，另一方面也拓展了對(duì)惡性腫瘤的治療手段，斑蝥中的有效成分是斑蝥素（can，CA），可抑制細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)分化，但因其對(duì)泌尿系有強(qiáng)烈刺激作用，限制了其在臨床的推廣應(yīng)用，NCTD是將CA去除1，2位兩個(gè)甲基合成而得，具有顯著的抗癌活性，其毒副作用較低

3、，也是目前唯一具有升高白細(xì)胞作用的抗腫瘤藥物，對(duì)常見實(shí)體腫瘤：肝癌、食管癌、結(jié)直腸癌、肺癌、膽囊癌、卵巢癌、黑色素瘤及血液系統(tǒng)腫瘤中的早幼粒細(xì)胞白血病、T淋巴細(xì)胞白血病等細(xì)胞的體內(nèi)外生長(zhǎng)均有明顯的抑制作用，實(shí)驗(yàn)表明：NCTD能在細(xì)胞毒作用、誘導(dǎo)凋亡、抗粘附轉(zhuǎn)移、抑制腫瘤血管生成等多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮抗癌作用。
　　 目的：研究NCTD對(duì)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266的增殖及其凋亡的影響及其作用機(jī)制。以期與化療藥同時(shí)應(yīng)用，達(dá)到減少并發(fā)癥，提

4、高疾病緩解率，增強(qiáng)病人耐受力，延長(zhǎng)病人的平臺(tái)期，提高病人的總生存期。
　　 方法：將不同劑量NCTD作用于人骨髓瘤細(xì)胞株U266，通過檢測(cè)以下指標(biāo)來(lái)觀察NCTD對(duì)U266細(xì)胞株的影響：1.不同劑量及時(shí)段NCTD作用后臺(tái)盼藍(lán)拒染率以明確NCTD對(duì)U266細(xì)胞株的抗增殖作用，并找出實(shí)驗(yàn)所需NCTD的最佳劑量及最佳作用時(shí)間；2.倒置相差顯微鏡及光鏡下分別觀察NCTD作用于U266細(xì)胞前后的細(xì)胞密度、形態(tài)及結(jié)構(gòu)的變化；3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

5、NCTD作用于U266細(xì)胞前后細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期來(lái)觀察U266細(xì)胞株經(jīng)NCTD作用后是否發(fā)生凋亡以及凋亡的初步機(jī)制。4.通過RT-PCR、免疫組化對(duì)Survivin、VEGF基因及蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)一步探討NCTD誘導(dǎo)U266細(xì)胞株凋亡的機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.NCTD能有效地抗U266細(xì)胞株增殖，且隨著藥物劑量及作用時(shí)間增加抗增殖作用增強(qiáng)，抑制率與藥物劑量和作用時(shí)間呈依賴性，在40μmol/L，作用48h時(shí)

6、作用達(dá)到頂峰。
　　 2.NCTD能夠誘導(dǎo)人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株U266凋亡，光學(xué)顯微鏡下可見典型的凋亡改變：染色質(zhì)邊移、核皺縮、核碎裂、核分解。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得細(xì)胞凋亡率隨時(shí)間劑量增加而增加，與對(duì)照組比較有顯著性差異。
　　 3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)U266細(xì)胞經(jīng) NCTD作用后細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯；且倒置相差顯微鏡下細(xì)胞顯示為啞鈴型改變，提示細(xì)胞被阻滯在分裂期。
　　 4.NCTD作用于U266細(xì)胞后Su