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1、天津大學(xué)碩士學(xué)位論文利用重疊延伸PCR技術(shù)在釀酒酵母中構(gòu)建木糖代謝相關(guān)基因姓名:朱曼麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):生物化工指導(dǎo)教師:元英進(jìn)20090601ABSTRACTRenewablelignocellulosicmaterialsareconsideredtObetheattractivefeedstocksforethanolfuelproductionbyfermentationOnekeytechnologyincellulos
2、icethanolproductionistheCO—fermentationofbothglucoseandxylosewhichareproducedinpretreatmentandenzymolysisprocessesInordertofinallyconstructageneticallyengineeredSaccharomycesyeastthatcaneffectivelyCO—fermentglucoseandxyl
3、osetoethanol,thisstudyclonedthexylosemetabolicrelatedgenes—xylosereductaseandxylitoldehydrogenasebothfromPichiastipitisandNeurosporaerassa,putthemunderthecontrolofSaccharomycescerevisiaePGKpromoterandwillintegratethemint
4、othechromosomeofJcerevisiaehaploidwhichhashighethanoltoleranceTheresultsareasfollows:(1)ExtractedthegenomeDNAfromSaccharomycescerevisiae,PichiastipitisandNeurosporacrassacloned5targetgenes(SaccharomycescerevisiaePGKpromo
5、terPichiastipitisxyll/xyi2,Neurosporacrassaxyll/xyl2)throughPCRunder485“C,464“C,544“C,507℃,616“CTmtemperatureseperately(2)DevelopedtheoverlapextensionPCRmethod,andligatedthePGKpromoterwitheachgeneseperatelybythismethodin
6、steadofrestrictionenzymedigestionandvectorconstruction(3)SporulmionandhaploidizationofScerevisiaeCMCC2758whichhastolerancetohighethanolconcentration,transformedthishaploidwithpreparedtargetgeneswhichhave5SrRNAhomologouss
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