UTMD轉染HIF-1αshRNA聯(lián)合TAE治療肝癌的實驗研究.pdf

1、背景：缺氧誘導因子1α(Hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)基因的激活和過表達是經(jīng)導管肝動脈栓塞術(transcatheter arterial embolization,TAE)后肝癌復發(fā)和轉移的重要因素，提高TAE的治療效果則必須抑制HIF-1α的高表達。
　　目的：超聲轉染HIF-1αshRNA至肝癌細胞內，抑制HIF-1α的表達，提高TAE的治療效果。
　　方法：1、體外缺

2、氧培養(yǎng)大鼠肝癌細胞walker256，將靶向針對HIF-1α的短發(fā)夾狀RNA(small hairpin RNA，shRNA)即HIF-1αshRNA表達質粒與超聲微泡Sonovue混合后，利用超聲靶向微泡破壞(ultrasound targeted microbubbles destruction, UTMD)技術將質粒轉染至細胞內，觀察HIF-1α的沉默效果。2、評估UTMD體內轉染時不同條件對大鼠的損傷效應；評估安全的轉染條件下介

3、導eGFP肝內轉染時的轉染效果，有助于選擇安全、有效的轉染條件。3、構建wistar大鼠肝癌模型。經(jīng)大鼠尾靜脈注入shRNA表達質粒與SonoVue的混合液，同時在大鼠肝癌部位用合適的超聲條件擊碎微泡，將shRNA質粒釋放入細胞，觀察沉默HIF-1α基因表達的效果和腫瘤大小的變化；超聲輻照完畢后行TAE。研究中設置不同的實驗組：對照(control)組、UTMD組、TAE組、UTMD+TAE組，對比分析各組對肝癌的治療效果。
　　

4、結果：1、體外實驗證實HIF-1αshRNA能夠有效抑制缺氧條件下walker256肝癌細胞內HIF-1α的表達；2、UTMD介導基因肝內轉染時，SonoVue劑量為4ul/g條件下，輻照條件為1MHz，20％DC，輻照6min時，超聲強度≤1.5w/cm2對大鼠無明顯損傷，1.5w/cm2輻照6min可以獲得較好的轉染效果。3、體內實驗結果顯示：control組腫瘤持續(xù)增大，TAE組肝癌前期腫瘤生長明顯受抑制，后期出現(xiàn)復發(fā)，UTMD組