替米沙坦中國人群的遺傳藥理學(xué)研究.pdf

1、第一章藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的遺傳多態(tài)性對(duì)替米沙坦藥動(dòng)學(xué)的影響 替米沙坦(telmisartan)是一種血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)1型(AT1)受體拮抗藥，具有高選擇性、不可逆地拮抗AT1受體，而不抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，不影響緩激肽的效應(yīng)；也不與其它激素受體和離子通道結(jié)合或產(chǎn)生阻斷作用，因而不影響包括心血管調(diào)節(jié)在內(nèi)的其它受體系統(tǒng)。近年來對(duì)替米沙坦研究的范圍還涉及有心血管(心力衰竭、心肌肥厚、心肌梗死等)、內(nèi)分泌(糖尿病等)、腎病(糖尿病

2、腎病、蛋白尿等)和神經(jīng)系統(tǒng)(腦卒中)等眾多領(lǐng)域，其已成為近年來心血管領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，倍受臨床關(guān)注。替米沙坦的體內(nèi)藥物濃度及降壓療效存在很大的個(gè)體差異，而導(dǎo)致這種差異的原因目前尚不明確。 多種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與替米沙坦的吸收、分布、代謝、排泄過程，且研究表明，多種編碼藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因存在單核苷酸基因多態(tài)性，遺傳因素所導(dǎo)致的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性的差異可能是導(dǎo)致替米沙坦血藥濃度和藥物反應(yīng)性個(gè)體差異的原因之一。替米沙坦的體內(nèi)過程主要受MDR

3、1(多藥耐藥蛋白1)、MRP2(多藥耐藥相關(guān)蛋白2)和OATP1B3(有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1B3亞型)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的影響，而上述轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因多態(tài)性可影響各自底物的血藥濃度及藥代動(dòng)力學(xué)。因此，本章我們從健康受試者及高血壓患者兩大人群出發(fā)，探討上述三種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因多態(tài)性是否影響替米沙坦在人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征及降壓療效。 方法： 采用限制性片段長度內(nèi)切酶(PCR-RFLP)的方法對(duì)60名中國健康男性志愿者的MDR1C3435

4、T、MRP2G1249A、MRP2C3972T、OATP1B3T334G和OATP1B3G699A位點(diǎn)進(jìn)行基因分型，從中挑選適合的基因型個(gè)體進(jìn)行進(jìn)一步的研究。 基因型符合要求的受試者按照40mg的劑量單次口服替米沙坦片，并于服藥前(0h)及服藥后0.25h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、48h分別采集肘靜脈血5mL，分離血漿，采用HPLC-MS法測(cè)定受試者體內(nèi)不同時(shí)間

5、點(diǎn)血漿中替米沙坦的藥物濃度。采用DAS2.0軟件計(jì)算替米沙坦的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并使用SPSS13.0軟件包比較基因型組間替米沙坦的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。 選擇符合1999年WHO/ISH診斷標(biāo)準(zhǔn)的原發(fā)性高血壓病人，治療前測(cè)定基礎(chǔ)血壓。按照每天一次，每次40mg的給藥劑量，連續(xù)服用替米沙坦片30天，測(cè)定治療30天后的血壓，采集第30天服藥前血樣，進(jìn)行替米沙坦穩(wěn)態(tài)血漿藥物谷濃度的測(cè)定并對(duì)MDR1C3435T、MRP2C3972T、OATP1B

6、3T334G和OATP1B3G699A位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。采用HPLC-FLD法測(cè)定血漿中替米沙坦的濃度，使用SPSS13.0軟件包比較基因型組間替米沙坦的穩(wěn)態(tài)谷濃度及療效間的差異。 結(jié)果： MDR1C3435T、MRP2G1249A、MRP2C3972T、OATP1B3T334G和OATP1B3G699A位點(diǎn)的等位基因發(fā)生頻率與文獻(xiàn)報(bào)道及HapMap中報(bào)道的結(jié)果基本一致，其中OATP1B3T334G和OATP1B3G69

7、9A位點(diǎn)間呈完全連鎖不平衡。 19位參加藥動(dòng)學(xué)研究的受試者，服藥后替米沙坦的平均藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Tmax、Cmax、t1/2、AUC0-48和AUC0-∞分別為1.4±0.7h(0.5～3.0h)、312.7±279.7μg/L(26.4～871.7μg/L)、13.9±8.1h(2.5～38.9h)、1477.4±927.4μg·h/L(184.8～3134.0μg·h/L)和1662.3±1100.1μg·h/L(194.7～38

8、16.2μg·h/L)。個(gè)體間替米沙坦的上述藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)間都存在很大的個(gè)體差異。經(jīng)方差分析及獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，替米沙坦的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)在MDR1C3435T、MRP2G1249A、MRP2C3972T和OATP1B3T334G/G699A位點(diǎn)不同基因型個(gè)體間均無顯著性差異。 58位高血壓患者治療前后的血壓分別為164/94mmHg(SBP變化范圍：220～130mmHg；DBP變化范圍：128～70mmHg)和143/87mmH

9、g，服用替米沙坦30天后，其血漿中藥物穩(wěn)態(tài)谷濃度為50.10±6.95μg/L，個(gè)體間的藥物血藥濃度同樣存在很大的個(gè)體差異。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，MDR1C3435T、MRP2C3972T、OATP1B3T334G/OATP1B3G699A基因多態(tài)性對(duì)替米沙坦的穩(wěn)態(tài)谷濃度變化沒有影響。MRP2C3972T基因多態(tài)性與治療前后收縮壓的變化值有關(guān)，基因型為3972TT的個(gè)體表現(xiàn)出更好的降壓效果。 結(jié)論 MDR1C3435T、MRP2

10、G1249A、MRP2C3972T、OATP1B3T334G/G699A位點(diǎn)的基因多態(tài)性不影響健康中國男性志愿者替米沙坦的藥物代謝動(dòng)力學(xué)。MDR1C3435T、MRP2C3972T、OATP1B3T334G/OATP1B3G699A基因多態(tài)性與高血壓患者替米沙坦的穩(wěn)態(tài)谷濃度間無相關(guān)性，但MRP2C3972T多態(tài)可以影響替米沙坦降低收縮壓的作用程度。 第二章SIRT1和DDAH1基因的遺傳多態(tài)性對(duì)中國人替米沙坦降壓療效的影響

11、 高血壓病是近半個(gè)世紀(jì)以來影響人類健康和生活質(zhì)量、導(dǎo)致人類死亡的重要疾病之一。替米沙坦是AT1受體阻斷劑，臨床上廣泛應(yīng)用于高血壓病的治療。研究發(fā)現(xiàn)在不同人種中，替米沙坦對(duì)輕、中度高血壓治療的有效率約為52％-56％，且其降壓療效存在很大的個(gè)體差異，大量的患者在使用替米沙坦單一藥物進(jìn)行治療時(shí)需要加大劑量或聯(lián)合使用其他降壓藥物。然而到目前為止，導(dǎo)致這種顯著地藥物反應(yīng)性個(gè)體差異的原因仍尚不明確。 隨著對(duì)替米沙坦藥理作用研究的不斷深入

12、，人們發(fā)現(xiàn)替米沙坦除具有降壓作用外，還具有改善胰島素抵抗和糖、脂代謝紊亂，及抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用，上述作用可能與替米沙坦增加PPAR-γ(過氧化物酶體增生物激活受體-γ)蛋白表達(dá)、上調(diào)DDAH(二甲基精氨酸二甲氨水解酶)表達(dá)和降低ADMA(非對(duì)稱性二甲基精氨酸)濃度有關(guān)。SIRT1屬于沉默信息調(diào)節(jié)因子2(Sir2)家族成員，該蛋白家族的活性依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的去乙?；?，其在調(diào)節(jié)基因表達(dá)、細(xì)胞凋亡、代謝和老化過程中發(fā)

13、揮重要作用。有研究發(fā)現(xiàn)AT1受體基因的近側(cè)啟動(dòng)子區(qū)(-61bp到+25bp)包含SP1結(jié)合位點(diǎn)，SIRT1能夠抑制SP1結(jié)合到AT1受體基因啟動(dòng)子上，從而下調(diào)AT1受體的表達(dá)，進(jìn)而影響AngⅡ發(fā)揮縮血管效應(yīng)，因此我們推測(cè)，DDAH1和SIRT1基因的遺傳多態(tài)性可能在受體后水平影響替米沙坦的降壓療效。 本研究從藥物作用受體后信號(hào)通路蛋白出發(fā)，研究SIRT1和DDAH1基因的遺傳多態(tài)性對(duì)替米沙坦降壓療效的影響，從而尋找影響替米沙坦降

14、壓療效的SNP，為臨床合理應(yīng)用替米沙坦進(jìn)行降壓治療提供指導(dǎo)。 方法： 原發(fā)性高血壓患者58例，應(yīng)用題米沙坦治療前測(cè)量基礎(chǔ)血壓，并抽取5ml肘靜脈血，分離血漿用于測(cè)定基礎(chǔ)狀態(tài)ADMA的濃度，血細(xì)胞用于DNA的提取。入組的病人按照每天一次、每次40mg的給藥劑量，連續(xù)服用替米沙坦30天。試驗(yàn)第31天服藥前測(cè)量治療后血壓，并抽取肘靜脈血7ml，用于治療后ADMA濃度的測(cè)定。采用PCR-RFLP法對(duì)DDAH1C143611G、D

15、DAH1C144563T和SIRT1C-1138T位點(diǎn)進(jìn)行基因分型；使用HPLC-MS法測(cè)定治療前后血漿中ADMA的濃度。使用SPSS13.0軟件包選取適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)替米沙坦的降壓療效及治療前后ADMA水平的變化情況進(jìn)行基因型組間的比較。 結(jié)果： 高血壓患者中DDAH1C143611G、DDAH1C144563T和SIRT1C-1138T位點(diǎn)的等位基因頻率及基因型與HapMap中報(bào)道的中國北京人群的基因分布特征一致。

16、 58例高血壓患者完成了本項(xiàng)研究，治療前患者血漿中ADMA的濃度為0.355±0.014μmol/L。按照每天給藥一次，每次40mg的劑量，連續(xù)服用替米沙坦片30天后，其血漿中ADMA的濃度為0.455±0.020μmol/L，其中14例患者治療后血漿ADMA的濃度降低，44例患者治療后血漿ADMA的濃度升高，治療前后血漿ADMA的濃度存在顯著的差異(p<0.001)。 DDAH1C143611G多態(tài)與替米沙坦的降壓療效