大黃魚(yú)源希瓦氏菌的分離鑒定及菌株致腐能力差異機(jī)制初探.pdf

1、大黃魚(yú)營(yíng)養(yǎng)豐富、水分含量高及pH值偏高，在捕撈后貯運(yùn)過(guò)程中極其容易腐敗。研究表明，微生物是引起水產(chǎn)品腐敗變質(zhì)的重要原因之一，其中溫帶水域捕撈的水產(chǎn)品的特定腐敗菌(special spoilagebacterial，SSO)多為希瓦氏菌屬（Shewanella）或假單胞菌屬(Pseudomonas)。目前，在SSO的研究主要集中在鑒定和貨架期的預(yù)測(cè)方面，而在SSO腐敗能力的差異機(jī)制方面研究較少。鑒于此，本研究采用生化與16S rRNA方法

2、鑒定大黃魚(yú)特定腐敗菌，篩選腐敗能力差異的希瓦氏菌，從氧化三甲胺還原酶基因簇角度初步研究希瓦氏菌腐敗能力差異。
　　1、采用生化和16S rRNA鑒定冷藏大黃魚(yú)貨架期終點(diǎn)的產(chǎn)H2S分離株菌，在滅菌魚(yú)汁和無(wú)菌魚(yú)塊分析致腐差異的希瓦氏菌。22株產(chǎn)H2S菌均為希瓦氏菌屬，其中S.baltica占59.4％，為S.putrefaciens占36.1％，S.hafniensis占4.5％。希瓦氏菌在滅菌魚(yú)汁中致腐能力存在顯著差異，其中S.ba

3、lticaXH2和XH8的缺點(diǎn)評(píng)分和TVB-N最高，S.putrefaciensXH14和S.baltica XH17菌最低。接種無(wú)菌魚(yú)塊的4株希瓦氏菌中XH2的樣品在72h出現(xiàn)腐敗氣味，48h細(xì)菌高于107cfu/g，產(chǎn)生較高的TMA、TVB-N、尸胺和腐胺，XH8菌次之，XH14和XH17菌最慢。
　　2、四株希瓦氏菌的最適溫度為25℃，鹽濃度0.3％生長(zhǎng)良好，鹽濃度3％生長(zhǎng)緩慢，具有一定的耐鹽性。XH2比XH17的TMAO的

4、還原能力多0.174μg/100mL，生物被膜的形成能力高41％，胞外蛋白酶活性高13.7％，XH2的AI-2活性是XH17的27.5倍，DKPs信號(hào)分子的含量是XH17的2.2倍。結(jié)果表明，希瓦氏菌腐敗能力與TMAO還原能力、生物被膜形成、胞外蛋白酶活性有關(guān)，群體感應(yīng)可能參與調(diào)控其腐敗能力。
　　3、四株希瓦氏菌都擴(kuò)增出2490bp的編碼TMAO還原酶的torA基因，序列同源性98％，且torA基因的表達(dá)量與致腐能力正相關(guān)，S.

5、baltica XH2表達(dá)量最高。預(yù)測(cè)的四株菌TorA蛋白為分泌蛋白，4個(gè)蛋白在理論等電點(diǎn)、不穩(wěn)定指數(shù)、總平均疏水性、氨基酸含量等理化性質(zhì)上有差異，其高級(jí)結(jié)構(gòu)相似。其中S.balticaXH2的分子量和不穩(wěn)定指數(shù)最大，理論等電點(diǎn)和總平均疏水性最小。研究進(jìn)一步擴(kuò)增分析了S.baltica XH2和S.baltica XH17的TMAO還原酶基因簇序列。在S.baltica XH2擴(kuò)增出了4條明亮的條帶，經(jīng)PCR擴(kuò)增測(cè)序和拼接后，獲得了97

6、11bp的TMAO還原酶基因簇全長(zhǎng)序列。生物信息學(xué)分析顯示，該序列包括TMAO還原酶的操作子torECAD及調(diào)控系統(tǒng)torRTS的7個(gè)ORF，分別為torE，torC，torA，torD，torS，torT和torR，其功能分別為硝酸鹽還原酶、C型細(xì)胞色素、TMAO還原酶、伴侶蛋白、傳感器、細(xì)菌周質(zhì)蛋白、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)器。通過(guò)BLASTn比較發(fā)現(xiàn)，該序列與S.baltica OS185的TMAO還原酶基因簇有很高的相似性，分別為93％、99％