特殊生境放線菌的抗恥垢分枝桿菌活性篩選及一株陽(yáng)性菌株的初步研究.pdf

1、隨著陸生放線菌資源不斷被發(fā)掘和深入研究,常規(guī)發(fā)酵方法下所得到的次生代謝產(chǎn)物資源越來(lái)越稀少,為新藥發(fā)現(xiàn)造成阻礙。目前,很多學(xué)者已經(jīng)把目光投向了一些特殊生境中的放線菌,包括海洋、動(dòng)植物內(nèi)生和一些極端環(huán)境。近些年來(lái),由于耐藥結(jié)核菌(XDR-TB,MDR-TB)的產(chǎn)生和傳播,使全球范圍的結(jié)核病疫情有上升趨勢(shì)。耐藥菌株對(duì)臨床上常用的利福平等藥物已產(chǎn)生嚴(yán)重耐藥性,近五十年未發(fā)現(xiàn)新靶點(diǎn)的抗結(jié)核臨床一線藥物。因此,尋找具有抗結(jié)核分枝桿菌活性的新化合物仍

2、是制藥領(lǐng)域所迫切需要的。而特殊生境中的放線菌次生代謝產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)和生物活性方面具有豐富多樣性,是尋找新型抗結(jié)核藥物的潛力資源。
　　 因?yàn)樵S多藥物類似物對(duì)靶點(diǎn)發(fā)揮抑制作用的具體機(jī)制還無(wú)法確定,所以在新藥篩選的方法上,基于活性的傳統(tǒng)天然產(chǎn)物藥物的篩選仍具有很大優(yōu)勢(shì)。這需要依賴于全細(xì)胞水平的體外實(shí)驗(yàn)。
　　 本文以恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegrnatir)為指示菌,對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離純化的296株來(lái)源于海底底泥

3、、紅樹(shù)林植物、高原土樣和蜚蠊內(nèi)生的放線菌進(jìn)行抗恥垢分枝桿菌活性篩選,發(fā)現(xiàn)46株陽(yáng)性菌株,分布于鏈霉菌屬和小單胞菌屬.陽(yáng)性率為15.5％。選取四種固體培養(yǎng)基及四種液體培養(yǎng)基對(duì)46株陽(yáng)性菌株進(jìn)行培養(yǎng)基篩選,每種培養(yǎng)基均發(fā)酵100 mL獲得發(fā)酵物。共得到368個(gè)樣品。測(cè)定粗提物樣品的抗恥垢分枝桿菌活性,并綜合產(chǎn)量因素從中選出19株活性較高的優(yōu)勢(shì)菌株及其發(fā)酵的培養(yǎng)基。將19株優(yōu)勢(shì)菌株進(jìn)行1 L規(guī)模的發(fā)酵,發(fā)酵產(chǎn)物采用反相柱層析初步分離成為幾個(gè)組

4、分,建立一個(gè)具有抗恥垢分枝桿菌活性的次生代謝產(chǎn)物組分庫(kù)。
　　 組分庫(kù)可繼續(xù)用于抗恥垢活性化合物的追蹤分離,并且支持其它拮抗活性模型的篩選。本文采用MTT法對(duì)次生代謝產(chǎn)物組分庫(kù)進(jìn)行了抗HeLa和HepG-2腫瘤細(xì)胞活性的篩選。
　　 鏈霉菌AR47為一株篩選出的優(yōu)勢(shì)陽(yáng)性菌株,粗提物在改良LB平板上測(cè)抗恥垢分枝桿菌的活性良好。本文對(duì)其燕麥培養(yǎng)基發(fā)酵得到的次生代謝產(chǎn)物作了初步研究,分離純化得到兩個(gè)化合物Q-A-1及Q-A-4