檢測腦脊液中CFP10和ESAT-6對結(jié)核性腦膜炎診斷意義的研究.pdf

1、目的:改進(jìn)斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(dot enzyme linked immunosorbant assay,Dot-ELISA),采用真空泵抽吸法濃縮檢測樣本,以期提高此方法的敏感性；通過實(shí)驗(yàn)分析方法改進(jìn)前后的優(yōu)劣,并確定試驗(yàn)程序中最適工作條件及方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性。應(yīng)用改進(jìn)的Dot-ELISA檢測腦脊液(cerebrospinal fluid,CSF)中結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)特異性

2、抗原培養(yǎng)濾液蛋白10(culture filtrate protein10,CFP10)和6000早期分泌性抗原靶(6kDa earlysecretory antigenic target,ESAT-6),對比其他輔助檢查及同類研究,評價其對結(jié)核性腦膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的診斷價值。
　　 方法:
　　 1、用改進(jìn)前和改進(jìn)后的Dot-ELISA檢測同一批臨床確診的結(jié)核性胸腔積液25例

3、和非結(jié)核性胸腔積液31例,統(tǒng)計(jì)分析方法改進(jìn)前后有無差異性；改變實(shí)驗(yàn)程序中的工作條件,利用對比實(shí)驗(yàn)確定最適工作條件,并評價改進(jìn)后此方法的重復(fù)性和穩(wěn)定性。2、收集58例臨床診為TBM患者的CSF,53例非TBM患者的CSF,應(yīng)用改進(jìn)后的Dot-ELISA分別檢測CSF中CFP10和ESAT-6,同時對入選的患者和采集的CSF作相關(guān)的病史統(tǒng)計(jì)和輔助檢查,并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、改進(jìn)前Dot-ELISA檢

4、測的敏感性為76.0％,改進(jìn)后的敏感性為92.0％,用最適工作條件檢測的敏感性為96.0％,改進(jìn)后和用最適工作條件與改進(jìn)前比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；改進(jìn)前特異性為93.5％,改進(jìn)后和用最適條件時特異性皆為90.3％,改進(jìn)前后特異性比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),驗(yàn)證其特異性的阻斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性:重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明,所建立的Dot-ELISA檢測結(jié)果的可重復(fù)率為100％。2、檢測CSF中CFP10抗原的敏感性為93.1

5、％,特異性為92.5％；檢測ESAT-6抗原的敏感性為91.4％,特異性為94.3％；敏感性和特異性均普遍高于針對MTB菌體或菌體物質(zhì)進(jìn)行的檢測及同類研究,如抗酸染色、結(jié)核桿菌培養(yǎng)、PCR等。
　　 結(jié)論:
　　 1、所建立的Dot-ELISA是一種有較高敏感性和特異性且重復(fù)性和穩(wěn)定性較好的檢測方法,能用于結(jié)核特異性抗原的檢測和結(jié)核性胸腔積液的輔助診斷。2、應(yīng)用改進(jìn)的Dot-ELISA檢測CSF中CFP10和ESAT-6