百草枯中毒通過調(diào)節(jié)內(nèi)源性H2S與NO的表達水平致大鼠急性肺損傷.pdf

1、目的：
　　探討百草枯中毒對SD大鼠內(nèi)源性H2S及NO的影響。觀察外源性H2S、H2S抑制劑（PPG）、誘導(dǎo)型NO合酶選擇性抑制劑（AG）對百草枯中毒致大鼠肺損傷的影響，進而推導(dǎo)其發(fā)病機制。
　　方法：
　　實驗1.健康清潔級雄性SD（sprague-dawley）大鼠（體重200±20g）60只，采用完全隨機分組法分10組，其中對照組（N組）5組，每組4只；染毒組5組，每組8只。生理鹽水空白對照組5組（N1、N2、N

2、3、N4、N5組，注射用生理鹽水灌胃0.5ml/kg，與相應(yīng)時間點的染毒組對照），染毒3小時組（PQ3組，20％百草枯溶液灌胃100mg/kg，3小時后），染毒6小時組（PQ6組），染毒12小時組（PQ12組），染毒24小時組（PQ24組），染毒48小時組（PQ48組）。按照實驗分組分別按要求予以胃內(nèi)灌生理鹽水或20%百草枯溶液，對照組及染毒組于3小時、6小時、12小時、24小時、48小時按分組分別予以檢測血液中內(nèi)源性H2S及NO的含量

3、，及時處死大鼠，采集肺組織標本。病理切片予以HE染色后光鏡下進行肺組織損傷病理學(xué)評分。
　　實驗2.健康清潔級雄性SD（sprague-dawley）大鼠（體重200±20g）50只，采用完全隨機分組法分5組，每組10只，對照空白組（C組、NS0.5ml/Kg灌胃,腹腔注射NS2ml/Kg）、染毒組（N組，20%百草枯溶液灌胃100mg/kg，腹腔注射NS2ml/Kg）、外源性H2S組（H組、20%百草枯溶液灌胃100mg/kg，

4、腹腔注射濃度為0.78mg/ml的NaHS2ml/Kg）、H2S抑制劑組（P組、20%百草枯溶液灌胃100mg/kg，腹腔注射濃度為15mg/ml的PPG2ml/Kg）、誘導(dǎo)型NO合酶選擇性抑制劑組（AG組，腹腔注射濃度為50mg/ml的AG2ml/Kg），12小時后，各組分別予以檢測血液中H2S及NO的含量，并同時處死大鼠，采集肺組織標本。肺組織標本行病理切片，顯微光鏡下行肺組織損傷病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果
　　實驗1：

5、r>　　1.肺組織病理學(xué)變化
　　（1）大體肉眼觀：
　　N組（N1、N2、N3、N4、N5組）肺組織（雙肺）肉眼觀呈淡粉紅色，表面光滑、平整，無出血點及淤斑，未見水泡，肺組織彈性好。PQ3、PQ6組肉眼觀可見肺組織稍有充血、輕微水腫，未見水泡，外觀紅色，未見淤斑，肺組織彈性欠佳。PQ12組、PQ24組可見肺組織充血明顯，外觀呈淡紅色，肺組織水腫，肺組織彈性差。PQ48組肺組織損傷程度最嚴重，肺組織外觀呈暗紅色，大片淤血及出

6、血病灶，嚴重充血水腫，肺組織彈性極差。
　?。?）鏡下觀：N組（N1、N2、N3、N4、N5組）肺泡骨架結(jié)構(gòu)完整，未見水腫，肺間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，肺微血管無充血、無血栓沉淀。肺泡腔內(nèi)及肺間質(zhì)內(nèi)均未見紅細胞及炎癥細胞。PQ3組鏡下觀，肺泡骨架結(jié)構(gòu)尚完整，稍有水腫。PQ6組，肺泡骨架結(jié)構(gòu)尚完整，稍有水腫，肺微血管稍充血。肺泡腔內(nèi)及肺間質(zhì)內(nèi)可見微量紅細胞及炎癥細胞。PQ12組可見肺泡骨架結(jié)構(gòu)欠完整，肺泡水腫，肺間質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)疏松，與肺泡腔內(nèi)均可

7、見少許紅細胞及炎癥細胞，肺微血管充血、血栓沉淀不明顯。PQ24組肺泡骨架結(jié)構(gòu)不完整，肺泡水腫明顯，肺泡腔內(nèi)及肺間質(zhì)內(nèi)大量紅細胞及炎癥細胞，肺微血管充血、微血栓形成明顯，肺間質(zhì)稍增厚。PQ48組可見肺泡結(jié)構(gòu)紊亂、不完整、破壞明顯，肺泡明顯水腫，透明膜形成，肺間質(zhì)內(nèi)及肺泡腔內(nèi)大量紅細胞出現(xiàn)及粒細胞侵潤，肺微血管充血、微血栓形成明顯，肺間質(zhì)顯著增厚，肺間質(zhì)稍纖維化，可見肺不張。
　　2.血清中內(nèi)源性H2S變化與NO的關(guān)系
　　與N

8、組比較，用百草枯染毒后3小時、6小時、12小時、24小時、48小時，血清中內(nèi)源性H2S與NO濃度均有顯著性差異（P<0.01）。
　　百草枯染毒后3小時、6小時、12小時、24小時、48小時、各組之間血清中內(nèi)源性H2S與NO濃度變化也均有顯著性差異（P<0.01）。
　　實驗2：
　　1.肺組織病理學(xué)變化
　?。?）大體肉眼觀：空白對照組（C組）肺組織骨架完整，呈粉紅色，表面光澤、平整、光滑，未見出血點及淤斑，未

9、見水泡。肺組織彈性好。染毒組（N組）肺組織肉眼觀外表暗紅色，表面不光滑、不平整，灰暗，可見出血點及淤血，水腫明顯，肺組織彈性差。外源性H2S組（H組）肉眼觀肺組織結(jié)構(gòu)尚完整，淡紅色，輕度充血水腫，無張力性水泡，表面欠光滑、平整，肺表面可見少許點狀暗紅色出血灶。肺組織彈性尚可。H2S抑制劑組（P組）可見肺組織外表呈明顯暗紅色，表面凹凸不平，肺組織廣泛充血水腫，肺表面可見大片狀暗紅色出血病灶。肺組織彈性極差。誘導(dǎo)型NO合酶選擇性抑制劑組（A

10、G組）肉眼觀肺組織外表呈暗紅色，輕微充血水腫，表面欠光滑、平整，肺表面可見點狀暗紅色出血灶。肺組織彈性欠佳。
　?。?）鏡下觀：空白對照組（C組）肺泡骨架結(jié)構(gòu)完整，未見水腫，內(nèi)皮細胞壁結(jié)構(gòu)完整，肺間質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)正常，肺微血管無充血、無血栓沉淀。染毒組（N組）肺泡骨架結(jié)構(gòu)欠完整，可見肺泡、肺間質(zhì)水腫，內(nèi)皮細胞壁結(jié)構(gòu)不完整，肺間質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)疏松，與肺泡腔內(nèi)可見紅細胞及炎癥細胞，肺微血管充血明顯。外源性H2S組（H組）及誘導(dǎo)型NO合酶選擇性

11、抑制劑組（AG組）肺泡骨架結(jié)構(gòu)尚完整，肺泡稍有水腫、內(nèi)皮細胞壁結(jié)構(gòu)尚完整，肺間質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)尚完整，與肺泡腔內(nèi)少許紅細胞及炎癥細胞。肺微血管充血、微血栓形成不明顯。H2S抑制劑組（P組）鏡下可見肺泡骨架結(jié)構(gòu)紊亂、破壞明顯，肺泡廣泛性充血水腫，透明膜形成，肺微血管充血、微血栓形成明顯，肺間質(zhì)內(nèi)部結(jié)構(gòu)不完整，與肺泡腔內(nèi)大量紅細胞及炎性細胞廣泛侵潤，可見肺不張。
　　2.血清中內(nèi)源性H2S變化與NO的關(guān)系
　　用百草枯染毒12小時后，

12、與C組比較，N組、H組、P組、AG組血清中內(nèi)源性H2S與NO濃度均有顯著性差異（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.百草枯中毒致SD大鼠ALI時，內(nèi)源性H2S變化與NO呈負相關(guān)（內(nèi)源性H2S表達減少，NO表達增高）。
　　2.通過給予外源性H2S（NaHS）和PPG，以及誘導(dǎo)型NO合酶選擇性抑制劑，增加H2S的表達和減少NO的表達，減輕百草枯染毒后急性肺損傷程度，表明百草枯可通過抑制內(nèi)源性H2S生成、促進NO釋放而導(dǎo)