神經(jīng)梅毒的診斷及其免疫炎癥性損傷機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景:
　　梅毒是由梅毒螺旋體(Treponemapallidum)感染引起的一種慢性、播散性性傳播疾病。梅毒螺旋體通過破損的皮膚或粘膜入侵機(jī)體,可侵犯機(jī)體所有的組織和器官,其中以神經(jīng)系統(tǒng)的損傷最常見,危害最大。在經(jīng)歷了20余年的梅毒流行后,近年來,神經(jīng)梅毒的報(bào)道在我國日益增多,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,威脅人類健康。
　　至今,神經(jīng)梅毒是世界性難題。首先,診斷神經(jīng)梅毒沒有敏感性和特異性均令人滿意的標(biāo)準(zhǔn)試劑,即使是現(xiàn)有有限

2、的神經(jīng)梅毒診斷試劑中,試劑的敏感性、特異性、可得性和操作的便捷性都面臨挑戰(zhàn);其次,盡管有研究顯示機(jī)體的免疫狀態(tài)在神經(jīng)梅毒的發(fā)病中起重要作用,但神經(jīng)梅毒的發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚。
　　目前,腦脊液性病實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(venerealdiseaseresearchlaboratorytest,VDRL)是國際上公認(rèn)的診斷神經(jīng)梅毒的金標(biāo)準(zhǔn),該方法的特異性較高,但其敏感性較低,臨床上VDRL陰性不能排除神經(jīng)梅毒,并且VDRL試劑在中國沒有商品化

3、的試劑盒,保存不易,操作繁瑣,價(jià)格昂貴因而不能被廣泛推廣。用于血清學(xué)篩選梅毒的非梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(rapidplasmaregain,RPR)和甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(toluidineredunheatedserumtest,TRUST),在我國其商品化試劑易得,保存方便,操作簡單,價(jià)格便宜,但在用于神經(jīng)梅毒的診斷中其敏感性和特異性均遭受挑戰(zhàn),但這類研究一般均基于小樣本的檢測,因而其在神經(jīng)梅毒診斷中的價(jià)值尚存

4、爭議。
　　長期以來機(jī)體的細(xì)胞免疫在清除中樞神經(jīng)系統(tǒng)梅毒螺旋體感染中的作用一直是神經(jīng)梅毒發(fā)病機(jī)制的研究熱點(diǎn)。而近年來免疫炎癥性損傷在感染性疾病中的作用被廣泛關(guān)注。梅毒螺旋體侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后,在局部誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。有研究報(bào)道,感染局部的輔助性T細(xì)胞1(Th1)免疫反應(yīng)有利于梅毒螺旋體的清除。但是機(jī)體的免疫應(yīng)答是一把雙刃劍,一方面有助于病原體的清除,而另一方面在疾病的病理損傷中也發(fā)揮重要的作用。因而感染局部的免疫狀態(tài)對疾病的轉(zhuǎn)歸具有重

5、要的作用。對疾病免疫反應(yīng)狀態(tài)的研究對闡明疾病的發(fā)病機(jī)制具有重要的意義。輔助性T細(xì)胞17(Th17)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的Th細(xì)胞亞群。研究顯示,在病原體的早期感染中Th17有助于機(jī)體對病原體的清除,但在許多慢性感染性疾病中Th17參與了局部的病理損傷,并與疾病的預(yù)后相關(guān)。因此提示Th17可能在感染性疾病中可能發(fā)揮重要的作用。但Th17是否參與了神經(jīng)梅毒的中樞系統(tǒng)的損傷目前尚無研究報(bào)道。
　　研究目的:
　　第一部分.比較分析

6、腦脊液VDRL、RPR、TRUST在神經(jīng)梅毒診斷中的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值,探索RPR、TRUST在神經(jīng)梅毒診斷中的價(jià)值。
　　第二部分.分析研究各期梅毒患者、各類型神經(jīng)梅毒外周血及腦脊液標(biāo)本中Th17或IL-17的表達(dá)水平。探討Th17細(xì)胞在神經(jīng)梅毒病程的進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸中的作用,研究其在神經(jīng)梅毒免疫炎癥性損傷中的可能機(jī)制。
　　研究方法:
　　第一部分.收集1132例梅毒病人的腦脊液和血清標(biāo)本,分別進(jìn)行R

7、PR、TRUST和VDRL實(shí)驗(yàn),同時(shí)還進(jìn)行了腦脊液RPR抗原稀釋實(shí)驗(yàn)(CSF-RPR-V),該試驗(yàn)是RPR抗原用10％生理鹽水1:2稀釋,該抗原制備是按照VDRL用于腦脊液檢測的抗原稀釋方法進(jìn)行稀釋后制備而成,抗原制備后按照血清RPR檢測方法進(jìn)行定性和定量試驗(yàn)。RPR和TRUST實(shí)驗(yàn)是按照血清的操作步驟進(jìn)行操作,VDRL是按照腦脊液的操作步驟進(jìn)行操作,比較它們在神經(jīng)梅毒診斷中的敏感性、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值。
　　第二部分

8、
　　1.收集69例非神經(jīng)梅毒患者、103例神經(jīng)梅毒患者和70例健康人的外周血,分離單個(gè)核細(xì)胞,加入含佛波醇酯(PMA)、離子霉素(ionomycin)和莫能霉素(Monensin)的培養(yǎng)基培養(yǎng)4小時(shí)后進(jìn)行胞內(nèi)染色,用流式細(xì)胞術(shù)檢測健康和各組病人外周血中IL-17陽性細(xì)胞和Th17的百分比;
　　2.收集上述69例非神經(jīng)梅毒患者、103例神經(jīng)梅毒患者和29例非梅毒感染無神經(jīng)系統(tǒng)損傷的外科手術(shù)者對照組的腦脊液,并對其中的44例

9、神經(jīng)梅毒患者進(jìn)行1年隨訪,收集其腦脊液標(biāo)本。用ELISA法檢測這些病人和對照腦脊液中IL-17的水平。
　　研究結(jié)果:
　　第一部分:
　　1.210例神經(jīng)梅毒腦脊液樣本中,腦脊液VDRL試驗(yàn)敏感性是81.4%、特異性是90.3%;腦脊液RPR試驗(yàn)敏感性是76.2%、特異性是93.4%;腦脊液TRUST試驗(yàn)的敏感性是76.2%、特異性是93.1%;腦脊液RPR-V試驗(yàn)的敏感性是79.5%、特異性是92.7%;
　

10、　2.四種檢測方法的敏感性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值一致(p>0.05),腦脊液VDRL試驗(yàn)特異性比RPR低(88.2%vs.93.4%,p<0.05),腦脊液VDRL實(shí)驗(yàn)特異性低于腦脊液TRUST實(shí)驗(yàn)(88.2%vs.93.1%,p<0.05),腦脊液VDRL和腦脊液RPR-V的特異性無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.腦脊液TRUST與RPR試驗(yàn)相比較,兩種檢測方法一致有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并且一致性較好(κ=0.86,p<0.01)。
　

11、　第二部分:
　　1.神經(jīng)梅毒組外周血Th17百分比比正常對照組高(1.94%±1.09%vs1.64%±0.53%p=0.034)和總IL-17+細(xì)胞百分比比正常對照組高(1.15%±0.59%vs0.84%±0.27%,p=0.002),而非神經(jīng)梅毒組外周血Th17百分比和總IL-17+細(xì)胞百分比與神經(jīng)梅毒組間無差異(p>0.05)。同時(shí)在神經(jīng)梅毒組中有癥狀神經(jīng)梅毒外周血總Th17和IL-17+細(xì)胞百分比比無癥狀神經(jīng)梅毒高分別

12、為(2.14±1.16vs1.65±0.91,p=0.027)和(1.29±0.67vs0.95±0.39,p=0.013)。
　　2.神經(jīng)梅毒組腦脊液中IL-17的檢出率為55.33%,IL-17的水平為6.81±10.79pg/ml;在非神經(jīng)梅毒組腦脊液中IL-17的檢出率為11.59%,IL-17的水平為0.18±0.54pg/ml;健康對照組腦脊液中未檢出IL-17。在有癥狀神經(jīng)梅毒和無癥狀神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的

13、檢出率分別為47.5%和61.9%,并且有癥狀神經(jīng)梅毒組腦脊液中IL-17水平較高(8.97±11.98pg/mlvs3.42±7.56pg/ml,p=0.009),其中以麻痹性癡呆患者腦脊液中IL-17水平最高(10.92±11.29pg/ml)。
　　4.腦脊液IL-17的水平與腦脊液中總蛋白濃度(r=0.249,p=0.012)和VDRL滴度(r=0.342,p=0.001)呈正相關(guān)。
　　5.在14例腦脊液白細(xì)胞增高

14、患者腦脊液中CD4+T占58.4±5.2%,Th17(CD3+CD4+IL-17+)細(xì)胞百分比為3.45±1.96%。其中IL-17來源于CD4+T占88±4.8%。
　　6.根據(jù)44例隨訪1年神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的水平分為IL-17陽性和IL-17陰性組,與26例IL-17陽性患者相比,18例IL-17陰性腦脊液VDRL的轉(zhuǎn)陰率較高(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　第一部分腦脊液RPR、TRUST、RPR

15、-V、VDRL實(shí)驗(yàn)敏感性無差異,陰性預(yù)測值和陽性預(yù)測值相一致,而腦脊液RPR、RPR-V、TRUST試驗(yàn)特異性比CSF-VDRL實(shí)驗(yàn)高,這一結(jié)果提示腦脊液TRUST或RPR在神經(jīng)梅毒的診斷具有一定的應(yīng)用價(jià)值,適合在我國和一些資源緊缺及設(shè)備落后的地方作為診斷神經(jīng)梅毒的替代指標(biāo)。
　　第二部分
　　1.在神經(jīng)梅毒患者外周血和腦脊液中TH17或IL-17的水平均升高,并且有癥狀神經(jīng)梅毒患者外周血和腦脊液中IL-17的水平均高于無癥

16、狀神經(jīng)梅毒患者。
　　2.神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的水平與腦脊液中蛋白濃度和VDRL的滴度呈正相關(guān),提示在神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷程度呈正相關(guān)。
　　3.神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的水平與VDRL的轉(zhuǎn)陰率呈負(fù)相關(guān),腦脊液中IL-17陰性組VDRL的轉(zhuǎn)陰率高,提示腦脊液中IL-17可能與神經(jīng)梅毒患者的預(yù)后有關(guān)。
　　4.神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17主要來源于CD4+T細(xì)胞。