卷柏雌激素活性篩選及對成骨樣細(xì)胞作用的實驗研究.pdf

1、雌激素對于女性生殖器官的發(fā)育及第二性征的維持具有不可替代的地位，對骨質(zhì)代謝和脂類代謝有著重要的調(diào)節(jié)作用。女性進入絕經(jīng)期后，隨著卵巢功能的衰退和體內(nèi)雌激素水平的下降，女性將出現(xiàn)更年期綜合癥，骨質(zhì)疏松、心血管疾病、老年癡呆等疾病的發(fā)病率也隨之上升。 雌激素替代療法(Estrogen replacement therapy,ERT)應(yīng)運而生，它是給予具有雌激素活性的藥物，以糾正機體由于雌激素分泌不足所造成疾病的一種醫(yī)療措施。ERT可緩

2、解由于雌激素降低引起的各種更年期癥狀，可降低骨質(zhì)疏松性骨折和冠心病的發(fā)生率。但長期應(yīng)用雌激素有誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌等的危險。 植物雌激素作為雌激素的替代品，以其安全性及顯著的效果，受到越來越多的關(guān)注。本課題在前期研究卷柏具有類雌激素樣活性的基礎(chǔ)上，以我國不同產(chǎn)地、種屬的十種卷柏為研究對象，利用整體動物實驗、體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗并結(jié)合報告基因檢測技術(shù)探討了各自植物雌激素樣作用及其可能的作用機制和影響因素；并利大鼠成骨肉瘤細(xì)胞模型，對

3、卷柏抗絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松活性成分進行了篩選。 本論文分兩部分第一部分：卷柏雌激素活性篩選的實驗研究目的：評價十種卷柏的雌激素活性，并探討卷柏具有植物雌激素作用的活性部位。 方法：首先，采用小鼠子宮增重法，觀察用藥前后小鼠子宮系數(shù)和體重變化情況；采用MTT法檢測受試物含藥血清及受試物直接對MCF-7細(xì)胞增殖作用的影響；并結(jié)合報告基因技術(shù)，比較了醇提和水提兩種不同提取方法以及十種卷柏的雌激素活性，綜合評價篩選出雌激素活性最強的卷

4、柏。然后，采用MTT法觀察卷柏總提物及卷柏上D101所得不同部位流份對乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖活性的影響，并結(jié)合報告基因技術(shù)對活性部位的雌激素活性進行比較。 結(jié)果：分為三部分(1)不同提取方法對卷柏雌激素活性影響的實驗研究。子宮增重實驗顯示：醇提部位組比水提部位組小鼠體重增長快，水提部位組小鼠子宮平均濕重及子宮系數(shù)比醇提部位組高；MCF-7細(xì)胞增殖實驗顯示：卷柏醇提物和水提物在一定的濃度范圍內(nèi)均能顯著促進MCF-7細(xì)胞的增殖，但

5、水提物比醇提物對MCF-7細(xì)胞增殖能力強；血清藥理顯示：卷柏醇提物和水提物含藥血清在血清含量為5％時，醇提比水提促細(xì)胞增殖作用強，而在血清含量為2.5％時，水提比醇提對MCF-7促增殖能力強。(2)十種卷柏雌激素活性篩選的實驗研究。 子宮增重實驗顯示：灌胃JB6和JB7可使小鼠的子宮系數(shù)明顯升高，與正常組相比差異顯著(P<0.01)；灌胃JB5可促進小鼠體重增長加速，與正常對照組比較P<0.05；血清藥理顯示：JB6、JB7、J

6、B10、JB1和JB9五組中藥含藥血清可顯著促進MCF-7細(xì)胞增殖；MCF-7細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示：JB3，JB5具有較強的促進MCF-7細(xì)胞增殖的活性，在0.2 mg/ml，0.3 mg/ml時，與正常組比較差異極顯著(P<0.01)，與E2無統(tǒng)計學(xué)意義；JB10在0.3 mg/ml，JB9在0.4 mg/ml，0.5 mg/ml時對MCF-7細(xì)胞也具有較強的促增殖活性，另外JB6和JB7在適當(dāng)?shù)膭┝繒r，對MCF-7細(xì)胞也具有較強的增

7、殖活性；JB8和JB1在適當(dāng)?shù)膭┝繉CF-7細(xì)胞有一定的促進作用；報告基因結(jié)果顯示：由ERα介導(dǎo)時，JB3、JB6、JB8、JB4及JB7均能誘導(dǎo)報告基因Luc的表達(dá)(P<0.01，P<0.05)；由ERβ介導(dǎo)時，除JB3外均能誘導(dǎo)報告基因Luc的表達(dá)(P<0.01)；(3)卷柏(Selaginella tarmariscina(Beauv.)Spring)活性部位的篩選。MCF-7細(xì)胞增殖實驗結(jié)果顯示：卷柏總提物及卷柏水部位、10％

8、EtOH、50％EtOH部位能夠顯著促進MCF-7細(xì)胞增殖，與正常組比較差異極顯著(P<0.01)；報告基因結(jié)果顯示：不論是由ERα或ERβ介導(dǎo)，卷柏活性部位給藥孔，熒光素酶活性都顯著高于正?？?P<0.01，P<0.05)，但仍低于E2孔(P<0.01)。并且卷柏與ERα的親和力較由ERβ介導(dǎo)時的親和力大。 結(jié)論：卷柏具有弱雌激素作用(1)卷柏水提物比醇提物具有更高的雌激素活性。(2)除JB2無明顯的雌激素樣活性外，其余9種卷

9、柏都有一定的雌激素樣活性，JB6是十種卷柏中雌激素活性較強較穩(wěn)定的一種。(3)卷柏屬植物卷柏水提物上大孔吸附樹脂所得水部位、10％EtOH部位及50％EtOH部位具有較強的雌激素活性，且50％EtOH部位雌激素活性遠(yuǎn)高于水部位和10％EtOH部位。第二部分：卷柏(Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring)對成骨樣細(xì)胞UMR106增殖作用的實驗研究目的：考察了卷柏屬植物卷柏總提物及其上大孔吸附樹脂所得不同

10、部位對成骨樣細(xì)胞UMR106的增殖作用。 方法：通過卷柏不同部位和UMR106成骨樣細(xì)胞共同體外培養(yǎng)，用MTT方法檢測了各部位對UMR106細(xì)胞增殖的作用。 結(jié)果：卷柏總提物及30％EtOH、40％EtOH部位對細(xì)胞具有較強的促增殖作用，水部位也有一定的促增殖作用。而卷柏10％EtOH、20％EtOH、50％EtOH部位對細(xì)胞增殖無明顯影響。 結(jié)論：卷柏水部位、30％EtOH、40％EtOH可能含有直接作用于成骨