選擇性環(huán)氧合酶-2抑制劑在膽固醇結(jié)石形成中作用的研究.pdf

1、膽石癥是一個世界性的常見病,高發(fā)病,其患者達人群的10﹪,嚴重危害著人們的身體健康.近年來,由于飲食習(xí)慣的改變,動物脂肪的攝入增加,國人膽石癥中膽固醇結(jié)石所占的百分比有所升高,如何防治和治療膽石癥已成為人們關(guān)心的問題.對于膽結(jié)石的發(fā)病機理目前尚不十分清楚,除了關(guān)系密切的類脂質(zhì)代謝異常和膽囊因素以外,膽結(jié)石的形成過程中還常常合并有慢性炎癥的過程.眾多實驗表明COX-2抑制劑能產(chǎn)生與非甾體類抗炎藥(nonsteriodal anti-inf

2、lammatory drugs, NSAIDs)藥物相類似的抑制前列腺素合成的作用,但是它在NSAIDs作用的位置只產(chǎn)生抗炎和鎮(zhèn)痛的作用,減少一系列的不良反應(yīng).NSAIDs可以減少膽固醇結(jié)石的形成,但其在抑制COX-2同時,也抑制了COX-1的活性,減少了COX-1誘導(dǎo)的PG合成,造成胃腸道的不良反應(yīng).選擇性COX-2抑制劑減少了這些不良副反應(yīng),有著很大的應(yīng)用前景.研究提示,COX-2參與了膽囊炎癥反應(yīng),選擇性COX-2抑制劑能阻止LP

3、S等炎癥因子刺激膽囊細胞PG的合成,有效地治療膽囊疾病.關(guān)于選擇性COX-2抑制劑在膽固醇結(jié)石形成過程中,能否通過影響炎癥反應(yīng)來抑制中減少結(jié)石形成的實驗研究,尚未見國內(nèi)外文獻報道.材料和方法采用普通家兔30只(3~4月齡,雌雄不拘,體重2.2~2.9kg),隨機等分為三組:空白組、成石組、實驗組.以普通顆粒飲料喂養(yǎng)1周以后分組單籠飼養(yǎng),空白組飼以普通顆粒飼料,成石組飼以1.2﹪高膽固醇飼料,實驗組在1.2﹪高膽固醇飼料的基礎(chǔ)上按10mg

4、.kg<'-1>.d<'-1>加飼特異性COX-2抑制劑西樂葆.7周后,禁食12h致死后剖腹,分離膽囊膽管,于膽囊頸剖結(jié)扎后離斷膽囊,收集膽汁觀察成石結(jié)晶情況.將膽囊經(jīng)生理鹽水漂洗后,肉眼觀察內(nèi)部粘膜改變;沿肝面縱行剖開,同時縱行切取約2mm×2~4mm膽囊組織,固定于10﹪福爾馬林液內(nèi)待行病理檢查和免疫組化.肉眼觀察膽汁色澤、粘度及有無膽固醇結(jié)晶(直徑>1mm,成形粗大的泥沙樣顆粒)形成.膽囊標本經(jīng)10﹪福爾馬林固定,包埋切片經(jīng)HE染

5、色后,交浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室光鏡下觀察膽囊炎癥情況,參照井岡山胃炎標準分極.膽囊組織石蠟切片脫蠟和水化后,按鏈霉素抗生素蛋白-過氧化酶免疫組化試劑盒說明規(guī)范操作,每張切片加1滴過氧化物酶阻斷劑,室溫孵育10min;生理鹽水沖洗;加入非免疫動物血清,室溫孵育5min;以0.2﹪牛血清白蛋白按1;1000稀釋一抗(鼠抗兔COX-2多克隆抗體),室溫過夜;生理鹽水沖洗3min×5次;加入生物素標記的二抗室溫孵育30min;生理鹽水清洗,鄰

6、二茴香胺(AEC)顯色劑顯色1~2min;自來水沖洗后,蘇木素復(fù)染15min;直接水性AEC封片劑封固.免疫組化染色結(jié)果COX-2陽性呈紅色,陰性為藍色.于浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院形態(tài)中心以高清晰度彩色病理圖文報告分析系統(tǒng)(HPIAS-1000)半定量測定COX-2表達陽性面密度.各組膽汁結(jié)晶情況以分數(shù)表示,行卡方檢驗;黏膜炎癥分級參考井岡山胃炎標準,行等級秩和檢驗;黏膜上皮COX-2表達量數(shù)據(jù)采用陽性面密度值,以x±s<,x>表示,組間差異行方