新生血單個核細(xì)胞缺血心肌移植后細(xì)胞活性和左室重構(gòu)的研究.pdf

1、我們研究目的是證實臍血中單個核細(xì)胞通過適當(dāng)培養(yǎng)條件可以分化形成具有內(nèi)皮細(xì)胞特征的細(xì)胞,并應(yīng)用新生犬外周血單個核細(xì)胞模擬臍血單個核細(xì)胞移植進(jìn)入缺血心肌組織,觀察細(xì)胞活性及其對左室重構(gòu)的影響,探討細(xì)胞移植治療心肌缺血的有效性.第一部分 臍血單個核細(xì)胞培養(yǎng)及培養(yǎng)細(xì)胞特性觀察;目的:研究能否從臍血中分離內(nèi)皮前體細(xì)胞,并對此類細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和鑒定.結(jié)果:梯度離心法獲取的外周血單個核細(xì)胞活細(xì)胞百分率92±4﹪,臍血單個核細(xì)胞95±3﹪,兩組無差別,外

2、周血單個核細(xì)胞CD34陽性率僅為3±0.6﹪,臍血陽性率22±4﹪,后者明顯高于前者.臍血單個核細(xì)胞48h后貼壁細(xì)胞生長良好,出現(xiàn)梭形細(xì)胞.培養(yǎng)早期可見圓形細(xì)胞類似于白細(xì)胞,但培養(yǎng)10d后圓形細(xì)胞明顯減少.培養(yǎng)細(xì)胞過程中可見細(xì)胞呈現(xiàn)梭形,部分細(xì)胞伸展.貼壁細(xì)胞可排列成條索狀.高倍鏡下這些細(xì)胞的核較大,部分細(xì)胞可見分裂相,貼壁細(xì)胞KDR,VE-cadherin,CD34陽性,僅有少量貼壁細(xì)胞表達(dá)CD45.超過95﹪的貼壁細(xì)胞能夠攝取DiI

3、-ac-LDL.RT-PCR提示分離培養(yǎng)的單個核細(xì)胞含有eNOS和FLT-1/VEGF receptor-1 mRNA.第二部分 新生犬單個核細(xì)胞缺血心肌移植后細(xì)胞活性及其對左室重構(gòu)影響的研究;目的:應(yīng)用新生犬外周血單個核細(xì)胞模擬臍血單個核細(xì)胞移植進(jìn)入缺血心肌組織,觀察細(xì)胞活性和其對左室重構(gòu)的影響,探討該細(xì)胞移植治療心肌缺血的有效性.結(jié)論:1.臍血中分離單個核細(xì)胞方法簡單,CD34<'+>細(xì)胞率較外周血高.2.在有VEGF,bFGF和I

4、GF-1存在的條件下培養(yǎng)臍血單個核細(xì)胞所獲得的大量貼壁細(xì)胞具有內(nèi)皮細(xì)胞特性,生長速度和數(shù)量較外周血有明顯優(yōu)勢.3.建立了犬結(jié)扎前降支心肌缺血模型,在術(shù)后早期及30d觀察到嚴(yán)重心肌缺血后出現(xiàn)心室擴(kuò)張,左室輪廓呈球形,收縮和舒張功能降低,心肌應(yīng)力增加,心房出現(xiàn)代償性收縮增強(qiáng)和張力增加,心肌出現(xiàn)纖維化,證實心肌缺血后左室重構(gòu)是一個慢性進(jìn)行性過程.4.首先應(yīng)用新生犬(出生后5h)外周血單個核細(xì)胞進(jìn)行缺血心肌內(nèi)移植,由于其成分與臍血相似,開拓了實