高遷移率族蛋白B1介導(dǎo)胰腺癌化療耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究高遷移率族蛋白B1(HMGB1)基因不同表達(dá)水平對(duì)胰腺癌細(xì)胞化療耐藥性的影響
　　方法：(1)常規(guī)培養(yǎng)4株胰腺癌細(xì)胞系，設(shè)計(jì)不同的吉西他濱作用濃度及作用時(shí)間處理4株胰腺癌細(xì)胞，分別運(yùn)用RT-PCR、Western Blot方法依次檢測(cè)藥物作用前后HMGB1在轉(zhuǎn)錄、翻譯水平的表達(dá)狀況，并分析HMGB1的表達(dá)水平與吉西他濱作用情況的關(guān)聯(lián)性。(2)構(gòu)建針對(duì)HMGB1的siRNA真核表達(dá)載體pSIREN-HMGB1/siRNA以

2、及HMGB1亞克隆的真核表達(dá)載體pBABE-HMGB1，用逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞，篩選穩(wěn)定表達(dá)株，并以相應(yīng)空轉(zhuǎn)細(xì)胞株作為對(duì)照組，運(yùn)用RT-PCR、Western Blot、MTT方法檢測(cè)相關(guān)mRNA、蛋白表達(dá)水平及吉西他濱的IC50。
　　結(jié)果：HMGB1在4株胰腺癌細(xì)胞中均有不同程度的表達(dá)，其表達(dá)水平隨吉西他濱作用濃度的增加或作用時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高;沉默HMGB1的表達(dá)后胰腺癌細(xì)胞的存活率降低;上調(diào)HMGB1表達(dá)后吉西他濱對(duì)