脂肪組織基質(zhì)血管組分治療大鼠急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為兩個(gè)部分： 第一部分: 脂肪組織基質(zhì)血管組分的分離與培養(yǎng) 目的： 從大鼠脂肪組織中分離、培養(yǎng)具干細(xì)胞標(biāo)志的基質(zhì)血管組分(stromal vascular fraction，SVF)細(xì)胞，為干細(xì)胞的研究和應(yīng)用尋求更便捷的來源。 方法： 采用I型膠原酶消化分離SD大鼠皮下脂肪組織，離心后取沉淀層細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。免疫熒光法檢測(cè)CD31、CD34陽性表達(dá)。 結(jié)果： 第2代源于脂肪

2、組織的基質(zhì)血管組分，免疫熒光顯示CD31陰性、CD34陽性。 結(jié)論： 大鼠脂肪組織中可分離出含有具干細(xì)胞標(biāo)志的SVF。 第二部分：熒光標(biāo)記的脂肪組織基質(zhì)血管組分移植對(duì)大鼠急性心肌梗死的治療觀察 目的： 用帶GFP的慢病毒感染SVF后，移植到大鼠急性心梗部位，觀察其在心肌組織內(nèi)存活、分布情況及對(duì)大鼠心肌結(jié)構(gòu)和功能的影響。 方法： 通過結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支制作SD大鼠急性心肌梗死模型。

3、隨機(jī)將24只大鼠分為假手術(shù)組、心梗對(duì)照組和SVF移植組，每組8只。建模1h后，假手術(shù)組和心梗對(duì)照組心外膜下注射磷酸鹽緩沖液(PBS)各100μl，SVF移植組同法注射SVF 100μl(細(xì)胞數(shù)1×106)，各組大鼠分別于手術(shù)后2周檢測(cè)心功能；取心肌缺血部位組織冰凍切片，用熒光顯微鏡觀察心肌細(xì)胞熒光信號(hào)及其分布情況；HE染色觀察各組大鼠心肌的病理改變并用計(jì)算機(jī)圖象分析測(cè)定梗死面積；免疫組化法檢測(cè)心肌組織中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD31的表達(dá)情況測(cè)定

4、血管內(nèi)皮密度。 結(jié)果： 1.心功能測(cè)定顯示，+dp/dtmax：假手術(shù)組4830.74±863.36mmHg/s，心梗對(duì)照組1952.94±635.13mmHg/s，SVF移植組2742.65±659.50mmHg/s；-dp/dtmax：假手術(shù)組-4407.80±396.07mmHg/s，心梗對(duì)照組-1871.67±306.92mmHg/s，SVF移植組-2448.14±532.27 mmHg/s；LVEDP：假手術(shù)組

5、-3.14±7.95mmHg，心梗對(duì)照組38.86±17.79mmHg，SVF移植組7.17±15.58mmHg。與心梗對(duì)照組相比，SVF移植組LV+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯上升(P<0.05)，而LVEDP顯著降低P<0.05)；二者與假手術(shù)組相比，LV+dp/dtmax、-dp/dtmax均明顯降低(P<0.01)，LVEDP顯著升高(P<0.01)； 2.SVF移植組在缺血心肌組織局部及梗死區(qū)邊緣有GFP

6、熒光標(biāo)記細(xì)胞分布； 3.與假手術(shù)組相比，心梗對(duì)照組心肌細(xì)胞明顯減少，室壁變薄，周圍纖維組織增生明顯；與心梗對(duì)照組相比，SVF移植組心肌細(xì)胞壞死減少，部分心肌得到恢復(fù)，周圍纖維化程度減輕； 4.HE染色計(jì)算機(jī)圖象分析顯示，心梗面積：假手術(shù)組1％，心梗對(duì)照組38.22％，SVF移植組34.34％。與心梗對(duì)照組相比，SVF移植組心梗面積明顯減少(P<0.05)；二者均明顯大于與假手術(shù)組(P<0.01)； 5.心肌免疫組

7、化顯示，反映血管內(nèi)皮的CD31陽性細(xì)胞數(shù)：假手術(shù)組14.5個(gè)/視野，心梗對(duì)照組6.43個(gè)/視野，SVF移植組9.43個(gè)/視野。與心梗對(duì)照組相比，SVF移植組心梗區(qū)心肌組織CD31表達(dá)明顯增高(P<0.05)；二者均低于假手術(shù)組(P<0.01)。 結(jié)論： 1.帶GFP的慢病毒載體可作為移植細(xì)胞的示蹤標(biāo)記； 2.慢病毒感染標(biāo)記的SVF經(jīng)移植后在宿主心肌內(nèi)能夠存活，并減少心梗區(qū)面積； 3.SVF可促進(jìn)急性心肌梗