LIF-Stat3信號通路在多階段胃癌發(fā)生中的活化狀態(tài)及其潛在意義分析.pdf

1、目的： 檢測LIF/Stat3信號通路在胃癌組織和細(xì)胞系中的表達(dá)與活化特點并探討其潛在的腫瘤病理學(xué)意義。為達(dá)到上述研究目的，采用多種實驗技術(shù)mRNA和蛋白質(zhì)水平系統(tǒng)地分析胃癌中白血病抑制因子(Leukemia inhibitor factor，LIF)、信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signal transducer and activator of the transcription 3，Stat3)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vas

2、cular endothelial growth factor,VEGF)和存活素(Survivin)的表達(dá)情況，觀察LIF的異常表達(dá)對于Stat3信號通路的激活作用以及二者之間的關(guān)系，在BGC823細(xì)胞系中使用JAK激酶抑制劑AG490阻斷該信號傳導(dǎo)通路以了解Stat3信號通路的激活機(jī)制，并借此探討胃癌發(fā)生發(fā)展過程中可能存在的潛在分子機(jī)制。 材料與方法: 胃癌組織標(biāo)本選自大連醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所建立的胃癌組織庫。胃癌細(xì)胞

3、系A(chǔ)GS、HGC27購于美國標(biāo)準(zhǔn)菌庫(American Type Culture Collection,ATCC)：MGC803、BGC823從北京腫瘤研究所引進(jìn)。胃癌組織以癌旁相對正常粘膜作為對照，基于石蠟組織微陣列技術(shù)進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測。利用蛋白印跡分析和RT-PCR的方法平行檢測LIF、Stat3、VEGF和Survivin在胃癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況。而后，檢測JAK激酶抑制劑AG490處理前后BGC823細(xì)胞系中LIF、p-St

4、at3、VEGF和Survivin的表達(dá)情況。最后，采用t檢驗，X2檢驗及Spearman相關(guān)性分析對上述指標(biāo)的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)檢驗，p<0.01表明具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)果: 1．與癌旁相對正常胃粘膜比較，胃癌中LIF、VEGF和Survivin的表達(dá)及Stat3核易位的頻率均明顯提高，二者之間存在明顯差異(P=0.000)。 2．在65例胃組織中，45例(45/65，69.23％)表現(xiàn)為Stat3核易位，

5、43例(43/65，66.15％)表現(xiàn)為LIF染色陽性。此外，在45例核Stat3陽性的組織點中，有40例(40/45,88.89％)同時表現(xiàn)為LIF染色陽性。對于LIF和Stat3表達(dá)陽性率的分析可發(fā)現(xiàn)二者之間存在明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(X2=33.762，P<0.01)。 3．胃癌組織中VEGF的表達(dá)上調(diào)和Stat3核易位具有明顯的統(tǒng)計學(xué)正相關(guān)(r=0.502,P<0.01)，對于Survivin的檢測也發(fā)現(xiàn)了相同的現(xiàn)象(r=0.

6、533,P<0.01)。 4．胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS、HGC27、MGC803和BGC823的RT-PCR和蛋白印跡分析結(jié)果顯示：AGS中LIF的mRNA水平明顯高于其余三個細(xì)胞系，而Stat3、VEGF和Survivin的mRNA表達(dá)水平并無明顯差異。上述四個指標(biāo)的蛋白表達(dá)在四個細(xì)胞系中也未發(fā)現(xiàn)明顯的差異。 5．AG490處理胃癌細(xì)胞系BGC823前后的免疫組化結(jié)果顯示：Stat3磷酸化被抑制，VEGF和Survivin的表

7、達(dá)也相應(yīng)減弱但LIF無明顯變化：與此相一致，RT-PCR分析結(jié)果顯示：處理后VEGF和Survivin的轉(zhuǎn)錄水平明顯降低但LIF的變化不明顯。蛋白印跡分析結(jié)果顯示，VEGF的蛋白表達(dá)有較明顯降低。 6．在AG490處理后胃癌細(xì)胞系BGC823中，p-Stat3磷酸化被抑制并伴有下游基因VEGF和Survivin的表達(dá)下調(diào)。這提示，Stat3的活化在胃癌發(fā)生過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一；該通路可能是胃癌生物治療的潛在靶點。 結(jié)論: