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文檔簡介
1、目的:通過大、小鼠腦缺血耐受模型來研究冬凌草總黃酮對腦缺血耐受模型的保護作用,并通過測定血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE),炎癥細胞因子一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-1β、IL-8,細胞凋亡相關蛋白B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)及其相關X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)含量;觀察核轉錄因子NF-κBp65及神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF、BDNF的表達情況;計算腦梗死面積
2、,觀察腦組織形態(tài)學變化等,從而探討冬凌草總黃酮對腦缺血耐受模型的保護作用。
方法:采用阻斷雙側頸總動脈血流10min,恢復灌注120h后,再次阻斷雙側頸總動脈30min,再灌注22h的方法,復制小鼠腦缺血耐受模型。預處理組小鼠短暫缺血10min后,尼莫地平組、腦絡通膠囊組、冬凌草總黃酮各劑量(300 mg/kg、150 mg/kg、75mg/kg)組分別給予相應的藥物灌胃,假手術組、缺血再灌注損傷組、BIT模型組灌服同體積0.
3、5%羧甲基纖維素鈉(CMC),每天1次,連續(xù)給藥5天,造模后第5天(120h)給藥1h后,除假手術組外,其余各組小鼠分別阻斷血流30min,再灌注22h,取血清檢測血清中NSE水平,取腦測定組織腦中NO含量及NOS活力的變化,觀察腦組織病理形態(tài)學變化。
采用雙側頸總動脈短暫阻斷10min作為預處理時間,恢復灌注72h后,采用線栓法阻塞左側大腦中動脈2h,再灌注22h的方法(2VO+MCAO),復制大鼠腦缺血耐受模型。預處理各組
4、大鼠短暫缺血10min后,尼莫地平組、腦絡通膠囊組、冬凌草總黃酮各劑量(200 mg/kg、100 mg/kg、50mg/kg)組分別給予相應的藥物灌胃,假手術組、缺血再灌注損傷組、BIT模型組灌服同體積0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC),每天1次,連續(xù)給藥3天,給藥1h后,除假手術組外,其余各組大鼠進行MCAO手術,再灌注22h后,評估大鼠神經(jīng)功能缺失,測血清中NSE水平,腦組織TTC染色計算梗死面積,測定腦勻漿中TNF-α、IL-1β
5、、IL-8、Bcl-2、Bax、Casp-3的含量,常規(guī)HE染色觀察腦組織病理形態(tài)學變化,免疫組化法觀察GDNF、BDNF、NF-κBp65蛋白表達情況。
結果:小鼠腦缺血耐受模型及大鼠腦缺血耐受模型復制成功。冬凌草總黃酮能降低大、小鼠死亡率,顯著降低大鼠神經(jīng)功能缺失評分,減少大鼠腦梗死面積,降低大、小鼠血清中NSE水平,提高小鼠腦組織中NO含量及NOS活力;升高大鼠腦組織中TNF-α、IL-1β、Bcl-2含量,降低IL-8
6、、Bax、Casp-3含量,促進神經(jīng)營養(yǎng)因子GDNF、BDNF蛋白表達,抑制NF-κBp65蛋白表達;改善大、小鼠腦組織皮質及海馬區(qū)的病理損傷情況。
結論:冬凌草總黃酮通過誘導產生低濃度的細胞因子NO、NOS、TNF-α、IL-1β刺激機體產生內源性的保護機制,提高神經(jīng)元的抗損傷能力;升高腦組織中Bcl-2蛋白含量,降低Bcl-2相關蛋白Bax含量,抑制NF-κBp65蛋白表達,抑制半胱氨酸蛋白酶3(Casp-3)活性,抑制神
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