產(chǎn)細(xì)菌素芽孢桿菌的篩選及性質(zhì)研究.pdf

1、芽孢桿菌在自然界分布非常廣泛,多數(shù)芽孢桿菌的抗菌物質(zhì)具有抗菌譜廣,對酸堿度要求不高,熱穩(wěn)定性好,易于進行分子加工等特點。這些都為開發(fā)新型天然防腐劑以及生防制劑提供了很好的條件。
　　 本文從發(fā)酵食品中篩選出一株抗菌活性高、抗菌譜廣的芽孢桿菌,并對菌株及其產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)進行了鑒定。通過對分離菌株菌落形態(tài)和個體形態(tài)的觀察及一系列生理生化試驗,可初步鑒定為枯草芽孢桿菌,暫命名為B.C119。B.C119具有廣譜抗菌作用,對革蘭氏陽性菌

2、、革蘭氏陰性菌、酵母菌、霉菌都有一定的拮抗作用,其中對細(xì)菌作用最為明顯。
　　 培養(yǎng)基的組成和培養(yǎng)條件對枯草芽孢桿菌B.C119的生長及細(xì)菌素的產(chǎn)生有很大的影響。通過實驗得到優(yōu)化后的最佳培養(yǎng)基是:葡萄糖0.5％,蛋白胨1％,牛肉膏0.3％;最佳培養(yǎng)條件為:溫度37℃,初始pH6.5,種齡6h,接種量2％,溶氧量75mL/250mL,培養(yǎng)時間24h。另外生長曲線及抗菌活性曲線表明細(xì)菌素在發(fā)酵2h以后就開始產(chǎn)生,20h抑菌活性達(dá)到最

3、大值,36h后抑菌活性下降,即細(xì)菌素的大量積累始于對數(shù)期末期。
　　 通過硫酸銨鹽析實驗,確定采用飽和濃度為25％的硫酸銨就能把B.C119發(fā)酵液中的大部分抗菌物質(zhì)沉淀出來。對分離出的B.C119細(xì)菌素的性質(zhì)研究表明,此細(xì)菌素具有較好的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性,在30℃、40℃…100℃下分別處理30min、1h和2h,其中80℃處理1h抑菌活性下降9％,100℃處理2h抑菌活性下降最明顯為25％。在pH4～10的范圍內(nèi)抑菌活性基本

4、沒有變化,pH小于4時最大下降率為27％,pH大于11時最大下降率為18％。有機溶劑的處理對B.C119細(xì)菌素的抗菌活性有一定的影響,經(jīng)過甲醇、乙醇、正丁醇和氯仿處理的透析液的抑菌活性分別下降了56.5％、40％、45.5％和30％。經(jīng)過胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶處理的透析液的抑菌活性分別下降了48％、40％和28％,抗菌物質(zhì)損失較大,這一結(jié)果更加證實了細(xì)菌素的蛋白質(zhì)性質(zhì)。
　　 B.C119的發(fā)酵液經(jīng)過離心、濃縮、沉淀和透