日本血吸蟲性別差異表達(dá)分子Th細(xì)胞表位的預(yù)測及鑒定.pdf

1、血吸蟲病是一種分布廣泛、危害嚴(yán)重的人畜共患病.血吸蟲為吸蟲中罕見的雌雄異體,性別的分化對血吸蟲的發(fā)育及致病起著至關(guān)重要的作用.雌雄蟲合抱是血吸蟲雌蟲發(fā)育成熟和產(chǎn)卵的關(guān)鍵,成熟雌蟲所產(chǎn)生大量蟲卵而引起肝臟病變是造成宿主主要病理損害和疾病再傳播的前提. 本研究基于Th細(xì)胞介導(dǎo)的免疫效應(yīng)機(jī)制可能在抗感染和抗生殖疫苗中發(fā)揮著主要作用這一事實(shí),從日本血吸蟲轉(zhuǎn)錄本組序列中篩選出性別差異表達(dá)分子,預(yù)測可能的Th細(xì)胞表位;同時對我們前期預(yù)測的分

2、泌型分子的Th細(xì)胞表位進(jìn)行免疫學(xué)鑒定,為進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ). 本研究應(yīng)用基于計(jì)算統(tǒng)計(jì)法的數(shù)字差異展示技術(shù)從日本血吸蟲轉(zhuǎn)錄本組序列中篩選性別差異表達(dá)分子,結(jié)合國家人類基因組南方研究中心提供的相關(guān)序列信息,對選出的序列進(jìn)行注釋分析:應(yīng)用基于人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)、隱馬爾科夫模型、及權(quán)重矩陣分析等蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)預(yù)測算法軟件,預(yù)測上述序列的信號肽及跨膜結(jié)構(gòu).應(yīng)用基于結(jié)合基序、矩陣法和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等方法的多個服務(wù)器,預(yù)測上述序列中與人、鼠的MH

3、C Ⅱ類分子結(jié)合的肽;應(yīng)用基于分子動力學(xué)算法的受體配體嵌合空間結(jié)合模擬服務(wù)器,預(yù)測肽與MHC Ⅱ分子的結(jié)合情況,得到候選的Th細(xì)胞表位.用人工合成多肽法(偶聯(lián)到多聚賴氨酸骨架上)合成課題組前期預(yù)測出的日本血吸蟲分泌型分子的5個候選Th細(xì)胞表位,MTT法和氚標(biāo)記法測定候選表位體外刺激免疫小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的情況. 結(jié)果共篩選到20個日本血吸蟲性別差異表達(dá)分子全長序列,即9個雄蟲高表達(dá)分子,11個雌蟲高表達(dá)分子;序列的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)

4、現(xiàn)其中7個為分泌型整合蛋白質(zhì)(2個雄蟲高表達(dá),5個雌蟲高表達(dá)),13個為非分泌型蛋白質(zhì);表位預(yù)測得到了與人和鼠MHC Ⅱ類分子結(jié)合的21個Th細(xì)胞表位,結(jié)構(gòu)對接模擬預(yù)測優(yōu)化確定了6個混雜型候選Th細(xì)胞表位,其中來源于雌蟲、雄蟲高表達(dá)分子的各有3個表位,即CSPYFVICTTKQYTR (AY814326;雌蟲;分泌型假想蛋白質(zhì)分子)、YLCFVFGIIQAIYIF(AY8 13676;雄蟲;分泌型sj25四次跨膜超家族TE736分子)、

5、SETLIQVwAVNKSVP (AY815950; 雌蟲; 具泛素巰基酯酶活性) 、EGSSVLVORTHKSTS(AY810358;雌蟲;具鈣蛋白激酶活性)、FGLKRRDLIKDTM(AY812918;雄蟲;具天冬酰氨肽鏈內(nèi)切酶活性) 以及 AEPIRMILVAAGVEF(AY816103;雄蟲;相似谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶). 對前期預(yù)測的表位實(shí)驗(yàn)鑒定結(jié)果顯示: 5個候選表位中有2個(VVQSIGYKFHRHGYE (AY2