細胞外尼克酰胺磷酸核糖轉移酶通過非酶途徑加重大鼠腦缺血損傷.pdf

1、目的:
　　研究細胞外尼克酰胺磷酸核糖轉移酶(eNAMPT)對腦缺血損傷的影響，并探尋其作用機制。
　　方法:
　　大鼠側腦室注射野生型NAMPT蛋白和喪失酶活性的突變NAMPT蛋白H247A，通過大腦中動脈栓塞(MCAO)復灌誘導大鼠局灶性腦缺血，以缺糖缺氧(OGD)誘導原代混合神經(jīng)細胞和原代神經(jīng)元損傷，Western檢測NAMPT表達，免疫組化觀擦NAMPT分布變化，TTC染色計算梗死損傷體積，MTT與LDH釋放檢

2、測細胞活性，PI、DAPI染色檢測細胞壞死，ELISA檢測TNF-α釋放。
　　結果:
　　MCAO再灌注后24小時，缺血中心區(qū)eNAMPT水平上升，mRNA水平下降，缺血中心區(qū)、周邊區(qū)和假手術組腦內，NAMPT均主要分布在神經(jīng)元。重組NAMPT蛋白腦室內注射能夠加重MCAO引起的腦缺血性損傷。在原代培養(yǎng)神經(jīng)元，重組NAMPT蛋白對正常和OGD誘導的神經(jīng)元損傷均無明顯影響。但在原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞，重組NAMPT蛋白能濃度依賴的