普萘洛爾對膠質母細胞瘤侵襲遷移的作用及調控機制.pdf

1、研究背景:
　　 既往研究認為心理應激與機體免疫狀態(tài)相關。慢性應激可通過降低NK細胞的細胞毒作用、降低T細胞免疫應答及影響細胞因子生成，從而影響細胞的免疫活性。腫瘤患者的免疫狀態(tài)與其治療反應及預后密切相關，從而推斷慢性應激對腫瘤進展存在影響。應激激素包括腎上腺素、去甲腎上腺素(NE)及皮質醇，它們在生理狀態(tài)下以維持量存在于外周血中，在應激狀態(tài)下可大量分泌，在外周血中的濃度可提升數十倍。近來研究表明應激激素尤其是去甲腎上腺素可明顯

2、促進多種惡性腫瘤的侵襲，而應用β受體阻滯劑普萘洛爾(Propranolol)可以有效地逆轉該效應?；|金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteinase)是一蛋白家族，包括分泌型及膜結合型蛋白，可以水解膠原蛋白、層粘連蛋白、纖連蛋白及彈力蛋白等細胞外基質，有利于腫瘤細胞局部浸潤、侵襲遷移。由于明膠酶譜實驗的簡便性，其中MMP-2/9受到最多的關注。目前研究表明普萘洛爾可通過抑制NE誘導的MMPs分泌從而逆轉其促腫瘤侵襲作用，但其

3、內在機制尚不明確。人腦膠質母細胞瘤是一種高度惡性腫瘤，其復發(fā)灶多源于手術切除后腫瘤周邊浸潤或沿白質纖維束轉移，抑制膠質母細胞瘤的侵襲遷移對其治療有重要意義。目前普萘洛爾對膠質母細胞瘤侵襲遷移能力的影響尚不清楚。
　　 目的:
　　 研究普萘洛爾對NE作用下膠質母細胞瘤侵襲遷移能力的影響，并探討其內在機制;探討β受體阻滯劑普萘洛爾抗NE誘導的膠質母細胞瘤侵襲遷移的可行性。
　　 方法:
　　 用DMEM培養(yǎng)

4、基體外培養(yǎng)人腦膠質母細胞瘤細胞系T98G、U87、U251，以不同濃度NE(0.1～10μmol/L)作為模擬機體應激狀態(tài)的實驗組;在加入高濃度NE(10μmol/L)的培養(yǎng)基中加入普萘洛爾(1nmol/L)作為抗應激治療的實驗組;在加入高濃度NE(10μmol/L)的培養(yǎng)基中加入U1026作為ERK信號通路阻斷實驗的實驗組;采用無血清DMEM培養(yǎng)基作為實驗對照組。應用RT-PCR法檢測人腦膠質母細胞瘤細胞系β受體表達;Transwel

5、l法評價腫瘤細胞的遷移能力;采用上室面鋪matrgel的transwell小室法評價腫瘤的侵襲能力;MMT法評價腫瘤增殖能力;明膠酶譜法檢測腫瘤細胞的MMP-2分泌活性;WesternBlot法檢測腫瘤MMP-2蛋白水平及ERK信號通路的活性;免疫熒光法評估腫瘤細胞的骨架改變。
　　 結果:
　　 T98G、U87、U251三系膠質母細胞瘤細胞均表達β1、β2受體;NE對膠質瘤細胞遷移能力無明顯影響;NE不引起膠質瘤細胞

6、細胞骨架明顯改變;NE對腫瘤增值能力無明顯影響;與對照組相比，NE可明顯促進膠質瘤細胞的侵襲能力(P＜0.05)，這種促進效應隨著NE濃度的增加而增強，呈劑量依賴性;與對照組相比，NE可明顯促進膠質瘤細胞的MMP-2分泌活性，這種促進效應隨著NE濃度的增加而增強，呈劑量依賴性;與對照組相比，NE可明顯增強膠質瘤細胞ERK信號通路活性;應用普萘洛爾(1nmol/L)可以逆轉以上NE的促進效應;應用U1026可以抑制NE誘導的MMP-2分泌