誘導(dǎo)成人成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為神經(jīng)前體細(xì)胞及用于移植治療局灶性腦缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討成人成肌細(xì)胞在體外轉(zhuǎn)化為神經(jīng)前體細(xì)胞的可行性及成肌細(xì)胞來源的神經(jīng)前體細(xì)胞移植治療腦缺血的效果，為腦缺血的干細(xì)胞治療尋找新途徑。探討腦缺血后經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈移植成肌細(xì)胞來源的神經(jīng)前體細(xì)胞的可行性，為該細(xì)胞腦內(nèi)移植的方式探索新方法。 方法: 1.從成人顳肌培養(yǎng)成肌細(xì)胞，通過體外誘導(dǎo)使其向神經(jīng)前體細(xì)胞轉(zhuǎn)化，通過RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞誘導(dǎo)前后(巢蛋白，GFAP、NF68和Galc)的基因和蛋白表達(dá)情況，對(duì)

2、成肌細(xì)胞向神經(jīng)轉(zhuǎn)分化進(jìn)行鑒定。 2.用光化學(xué)法制作大鼠局灶性腦缺血模型，將成肌細(xì)胞來源的神經(jīng)前體細(xì)胞移植到腦缺血大鼠的缺血灶附近大腦皮層。通過行為學(xué)評(píng)分試驗(yàn)(平衡木試驗(yàn)、感覺刺激試驗(yàn)和肢體放置試驗(yàn))觀察神經(jīng)功能的變化；采用免疫組織化學(xué)染色的技術(shù)檢測(cè)移植細(xì)胞抗原標(biāo)志物(人核抗原、GFAP、MAP2和Galc)的表達(dá)，觀察移植細(xì)胞的存活、遷移和分化情況；采用HE染色結(jié)合圖像分析方法檢測(cè)腦梗死體積的變化。 3.經(jīng)短暫性腦缺血(

3、大腦中動(dòng)脈缺血)大鼠的頸內(nèi)動(dòng)脈注射成人成肌細(xì)胞及其來源的神經(jīng)前體細(xì)胞，觀察注射的細(xì)胞的存活、遷移和分化情況。 結(jié)果: 1.經(jīng)體外誘導(dǎo)，成人成肌細(xì)胞變?yōu)閼腋∩L(zhǎng)的細(xì)胞球，免疫細(xì)胞化學(xué)染色見細(xì)胞球表達(dá)巢蛋白，5-溴脫氧尿嘧啶核苷摻入試驗(yàn)陽性；細(xì)胞分化后表達(dá)NF68，GFAP和Galc。RT-PCR分析結(jié)果與免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果一致。 2.成人成肌細(xì)胞及其來源的神經(jīng)前體細(xì)胞移植后主要分布于大鼠腦梗死灶的附近，少量神經(jīng)前

4、體細(xì)胞見于腦梗死灶與細(xì)胞注射部位之間的胼胝體處。在腦梗死灶附近的神經(jīng)前體細(xì)胞中，部分同時(shí)表達(dá)MAP-2抗原和人核抗原，部分同時(shí)表達(dá)GFAP抗原和人核抗原。而在移植的成肌細(xì)胞中，未見到此情況。平衡木試驗(yàn)、感覺刺激試驗(yàn)和肢體放置試驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)胞移植2周后各組大鼠的神經(jīng)功能障礙均有改善，而接受成肌細(xì)胞來源神經(jīng)前體細(xì)胞移植的大鼠神經(jīng)功能改善優(yōu)于其它兩組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示差異具有顯著性，其它兩組間無差異。各組大鼠腦梗死體積之間差異沒有顯著性。

5、 3.成人成肌細(xì)胞及其來源的神經(jīng)前體細(xì)胞均出現(xiàn)在腦缺血灶周圍的腦實(shí)質(zhì)內(nèi)，表達(dá)人核抗原。免疫熒光組織化學(xué)染色顯示移植的神經(jīng)前體細(xì)胞中，部分同時(shí)表達(dá)MAP-2抗原和人核抗原，部分同時(shí)表達(dá)GFAP抗原和人核抗原。 結(jié)論: (1)成人成肌細(xì)胞在體外一定的誘導(dǎo)條件下能夠轉(zhuǎn)化為神經(jīng)前體細(xì)胞，后者可以進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，在體外能夠分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。 (2)成人成肌細(xì)胞來源的神經(jīng)前體細(xì)胞移植后可以在腦缺血灶