EGCG棕櫚酸酯體外抗HCV作用及機(jī)理研究.pdf

1、人類是地球上的重要成員，在影響環(huán)境的同時也被環(huán)境影響。病原體通過破壞人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)致使疾病發(fā)生。丙型肝炎病毒就是一種病毒性病原體，具有全球流行性的單鏈RNA病毒，根據(jù)其基因組變異區(qū)域的序列可將其分為6個基因型以及近百種基因亞型。病毒進(jìn)入人體后有較長的潛伏期，特異性侵入肝細(xì)胞通過增殖改變細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的平衡，使細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂甚至喪失，由慢性肝炎逐漸發(fā)展為肝硬化、肝癌以及爆發(fā)性肝衰竭，導(dǎo)致肝功能的徹底喪失，最終奪走人類的生命。
　　本

2、研究通過對表沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯（EGCG棕櫚酸酯）體外抗丙型肝炎病毒的效果的檢測，確定EGCG棕櫚酸酯的抗病毒作用。采用分子生物學(xué)的試驗(yàn)手段從細(xì)胞水平和分子水平探討研究EGCG棕櫚酸酯與肝細(xì)胞以及病毒三者之間相互作用的機(jī)理。
　　首先，采用CCK-8試劑盒檢測脂溶性EGCG棕櫚酸酯對Huh7.5.1的毒性作用，丙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒測量擴(kuò)增病毒的滴度，實(shí)時熒光定量PCR檢測用于實(shí)驗(yàn)的最佳病毒感染復(fù)數(shù)(multip

3、le of infection，MOI)，進(jìn)而研究藥物抗病毒的作用效果。通過免疫蛋白印記法(western bloting)檢測EGCG棕櫚酸酯對細(xì)胞干擾素通路STAT2蛋白的磷酸化水平作用，以及干擾熱休克蛋白成員——HSPA5表達(dá)，檢測EGCG棕櫚酸酯抗病毒的作用效果，確定藥物抗病毒的作用途徑。
　　結(jié)果:0～50μg/mL的EGCG棕櫚酸酯對Huh7.5.1沒有毒害作用，EGCG棕櫚酸酯具有明顯的預(yù)防細(xì)胞感染病毒以及抑制病毒增

4、殖的作用，但是預(yù)防效果與藥物添加濃度無明顯相關(guān)性;而隨藥物濃度增加EGCG棕櫚酸酯抑制病毒增殖的效果增強(qiáng)，當(dāng)濃度為25μg/mL時抑制效果最佳，此時病毒表達(dá)量是陽性對照組表達(dá)量的1/6。研究還發(fā)現(xiàn)，低濃度藥物持續(xù)刺激感染病毒的細(xì)胞能更大的降低病毒的增殖，同時，IFN-α的連續(xù)刺激感染細(xì)胞，丙型肝炎病毒的基因表達(dá)量是陰性對照的1/2，這很好的證明了臨床上IFN-α對于丙肝患者治療的有效率不足50％這一現(xiàn)象。我們推測EGCG棕櫚酸酯能替代傳

5、統(tǒng)干擾素成為有效治療藥物治愈疾病。
　　通過蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EGCG棕櫚酸酯能對STAT2蛋白進(jìn)行磷酸化修飾，慢病毒包裝干擾HSPA5蛋白的表達(dá)降低病毒的增殖，同時發(fā)現(xiàn)EGCG棕櫚酸酯的抗病毒作用也有所降低。我們推測HSPA5是丙型肝炎病毒增殖過程中起著重要促進(jìn)作用的宿主因子，干擾蛋白的表達(dá)則能大大降低病毒的增殖能力。EGCG棕櫚酸酯的抗病毒作用可能是通過修飾STAT2激活干擾素通路的抗病毒基因表達(dá)正向抑制病毒的增殖，同時特