熒光素酶體外監(jiān)測hTRAIL基因治療肺癌A549細胞的基因成像研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文熒光素酶體外監(jiān)測hTRAIL基因治療肺癌A549細胞的基因成像研究姓名：趙納申請學位級別：碩士專業(yè)：影像醫(yī)學與核醫(yī)學指導教師：崔建嶺20070301中文摘要性：Ad，粥hTRAⅢ以不同的感染復數(shù)感染A549細胞，培養(yǎng)48小時后，用細胞裂解緩沖液裂解存活細胞，經高速離心后取上清，加入含熒光素的檢測試劑后，應用液閃計數(shù)儀檢測熒光素酶發(fā)光的液閃計數(shù)。52測定ad1uc感染A549細胞后熒光索酶活性：應用Ad—luc以不

2、同的感染復數(shù)感染A549細胞，培養(yǎng)48小時后，用細胞裂解緩沖液裂解存活細胞，經高速離心后取上清，加入含熒光素檢測試劑后，應用液閃計數(shù)儀檢測熒光素酶發(fā)光的液閃計數(shù)。結果：l腺病毒感染力測定：AdEGFP轉染A549細胞48小時后，熒光逐漸達到最強，可觀測到的最低感染復數(shù)為01MOI，隨著MOI增大，染色陽性率逐漸增加，MOI=100時，陽性率達995％，說明運用腺病毒載體可有效將目的基因轉導入A549細胞中。2在以不同MOI的Ad1uch

3、TRAIL感染A549細胞48小時后，MTT結果顯示與對照相比各組細胞生長受到明顯抑制(p0。01)，隨著MOI增大，細胞生存能力逐漸降低。3流式細胞術分析發(fā)現(xiàn)，Ad1uchTRAⅡ，感染A549細胞48小時后，細胞膜上可檢燹4到hTRAIL的表達，且隨著MOI增大，hTRAIL的表達逐漸增多；Ad1uchTRAIL以不同MOI感染A549細胞后，均可檢測到明顯的細胞凋亡(pO01)，隨著MOI增大，細胞凋亡率呈上升趨勢：hTRAIL的