延長冠脈造影與經皮冠狀動脈介入治療間隔時間對X線導致的DNA雙鏈斷裂影響的研究.pdf

1、背景:冠心病(CHD)是一種高發(fā)病率以及高致死率的疾病。經皮冠狀動脈介入治療術(PCI)有著出色的療效，已經成為冠心病治療的重要方式。心血管疾病的介入治療離不開X線暴露，X線暴露可能會導致各式各樣輻射損傷的產生。由于復雜PCI的開展，冠心病介入治療過程中的輻射劑量有越發(fā)增高的趨勢。輻射損傷的發(fā)生與輻射劑量密切相關。理論上來說，延長照射間隔時間可以降低輻射損傷。事實上，有些情況下，例如等待患者家屬的決定，可以導致冠脈造影(CAG)與PCI

2、之間的時間間隔在30分鐘或者以上，在此種情況下輻射損傷能否降低，尚不明了。本研究的目的就是對此問題進行探討。評價輻射劑量的物理劑量指標由于不能考慮到年齡、輻射敏感性的個體差異、DNA修復能力的個體差異等因素的影響，所以準確性相對較低。于是輻射劑量的生物學指標可能是較為準確的評價輻射損傷的方法。近期的研究顯示γ-H2AX識別抗體免疫熒光技術可以可靠、敏感的評價造影過程中電離輻射導致的DNA損傷以及修復，而且可以排除個體差異的影響。DNA雙

3、鏈斷裂(DSBs)被認為是電離輻射損傷導致的最重要的DNA損傷形式。γ-H2AX焦點與DSBs密切相關，而且為1∶1的關系，故目前認為γ-H2AX焦點可以反應DSBs。通過應用抗γ-H2AX抗體,利用熒光顯微鏡就可以觀察到DSBs。本研究就是采用γ-H2AX識別抗體免疫熒光技術評價延長CAG與PCI之間的時間間隔時間對于X線輻射損傷的導致外周血單個核細胞DSBs的影響。
　　第一部分、利用γ-H2AX識別抗體免疫熒光技術評價不同的

4、照射間隔時間對X線導致的DNA雙鏈斷裂影響的體外研究
　　目的:本研究的目的是通過體外實驗研究，以γ-H2AX識別抗體免疫熒光技術來評價相同輻射劑量情況下不同的照射間隔對X線導致的人外周血單個核細胞DNA雙鏈斷裂(DSBs)的影響。
　　方法:經過醫(yī)院的倫理委員會批準并且簽訂知情同意書后10名自愿者入選本研究。每位自愿者分別經肘靜脈采集外周血標本10毫升，然后置入肝素抗凝管中。每位自愿者的血樣標本分為5組，一組作為空白對照組

5、，不予X線照射。其余四組標本給以X線照射，分別為60mGy一次組;30mGy兩次，照射間隔為15分鐘組;30mGy兩次，照射間隔為30分鐘組;30mGy兩次，照射間隔為60分鐘組。照射結束后統(tǒng)一對血標本進行一系列實驗室處理:分離提取單個核細胞，固定，以抗γ-H2AX抗體進行標記。利用免疫熒光技術測定γ-H2AX焦點數量。研究不同的照射間隔對人外周血單個核細胞X線導致的DSBs的影響。統(tǒng)計方法采用方差分析檢驗。
　　結果:
　

6、　1.經過輻射劑量為60mGy的X線照射后無論照射間隔時間長短，所有的受照標本的γ-H2AX焦點數量均較空白對照組升高。
　　2.空白對照組γ-H2AX焦點數量最低，為0.079foci/cell。60mGy一次照射組焦點數量最高0.817 foci/cell，其次為為30mGy兩次，照射間隔為15分鐘組為0.810foci/cell，但是兩組差異無統(tǒng)計學意義。30mGy兩次，照射間隔為30分鐘組以及30mGy兩次，照射間隔為60

7、分鐘組的γ-H2AX焦點數量較60mGy一次照射組明顯降低，分別為0.655foci/cell和0.519foci/cell，差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論:相較于一次60mGy的輻射劑量，將60mGy的輻射劑量，分成兩次，每次間隔30分鐘以上可以降低X線照射后γ-H2AX焦點數量。將照射間隔延長至30分鐘可以降低X線輻射導致的DSBs。
　　第二部分、經皮冠狀動脈介入治療術后外周血單個核細胞中DNA雙鏈斷裂的形成以及修復

8、r>　　目的:采用γ-H2AX焦點免疫熒光技術評價經皮冠狀動脈介入治療術(PCI)后人外周血單個核細胞中DNA雙鏈斷裂的形成以及修復狀況。
　　方法:簽署知情同意書后，13名經股動脈途徑行PCI的患者入選本研究，其中男性8名，女性5名，平均年齡為60.923±9.525歲。所有入選的研究對象分別于術前、術后10分鐘、20分鐘、30分鐘、1小時以及術后24小時抽血。所有的血液樣本的采取均直接通過動脈鞘管，除了最后一次為經過肘靜脈采血

9、。所有研究對象的冠脈造影(CAG)與PCI的時間間隔在5-35分鐘不等，研究對象術中所記錄的劑量面積乘積(DAP)值在32106 mGy.cm2到123202 mGy.cm2不等。將血樣送檢后分離單個核細胞、固定、加抗γ-H2AX抗體等一些列操作，利用共聚焦顯微鏡計數單個核細胞中γ-H2AX焦點數量。觀察γ-H2AX焦點在體內的形成以及消散的規(guī)律，并且采用直線相關回歸分析對γ-H2AX焦點數量與DAP數值進行相關回歸分析。
　　結

10、果:經過PCI過程中的X線暴露后，所有的接受經過股動脈途徑PCI術的患者的γ-H2AX焦點數量均有明顯的升高。7名的患者γ-H2AX焦點數量峰值出現在X線暴露結束后20分鐘，其余的6名患者的γ-H2AX焦點數量峰值出現在X線暴露結束后10分鐘。13名患者的γ-H2AX焦點數量峰值在0.27-1.10 foci/cell不等。隨后γ-H2AX焦點的數量開始下降。在X線暴露結束后24小時左右，恢復至基線水平。輻射劑量DAP值與X線暴露結束后

11、10分鐘、20分鐘、30分鐘、1小時的γ-H2AX焦點數值成直線相關關系。決定系數R2分別為0.843、0.750、0.846、0.628。
　　結論:無論輻射劑量的大小以及CAG與PCI之間的時間間隔長短，PCI術后γ-H2AX焦點的高峰均出現在X線暴露結束后10-20分鐘之間。輻射劑量DAP值與X線暴露結束后10分鐘至1小時的γ-H2AX焦點數值成直線相關關系。
　　第三部分、延長冠脈造影與經皮冠狀動脈介入治療間隔時間對

12、X線導致的人外周血單個核細胞DNA雙鏈斷裂影響的體內研究
　　目的:利用γ-H2AX焦點免疫熒光技術來評價研究延長冠脈造影(CAG)與經皮冠狀動脈介入治療(PCI)間隔時間對X線導致的人外周血單個核細胞DNA雙鏈斷裂(DSBs)的影響。
　　方法:共計58名接受PCI術的患者入選本研究。入選的研究對象隨機分為連續(xù)照射組（CAG最后一次X線曝光結束至PCI第一次X線曝光開始的間隔時間在5分鐘內）以及間隔照射組(CAG最后一次X

13、線曝光結束至PCI第一次X線曝光開始的間隔時間在30分鐘以上)。所有的研究對象于X線照射前以及X線照射結束后15分鐘采血。然后再對血標本進行一系列實驗室處理:分離提取單個核細胞，固定，以抗γ-H2AX抗體進行標記。利用免疫熒光技術測定γ-H2AX焦點數量。通過熒光顯微鏡計數γ-H2AX焦點數量，并進行兩組之間的對比來評價延長CAG與PCI間隔時間對X線導致的人外周血單個核細胞DSBs的影響。統(tǒng)計學方法為t檢驗以及x2檢驗。
　　結

14、果:無論CAG以及PCI之間的間隔時間是多少以及輻射劑量的大小，所有的研究對象經過CAG以及PCI術中的X線暴露后γ-H2AX焦點數量均有了明顯的升高。雖然兩組研究對象的基礎γ-H2AX焦點數量差異無統(tǒng)計學意義，但是PCI術后兩組研究對象的γ-H2AX焦點增長數量差異有統(tǒng)計學意義。其中連續(xù)照射組γ-H2AX焦點增長數量為0.793±0.149foci/cell，間隔照射組γ-H2AX焦點增長數量為0.659±0.212 foci/cel