多發(fā)性硬化及視神經脊髓炎的遺傳學與免疫學特點以及軸突損害評估與保護的研究.pdf

1、目的： 1.探索AQP4啟動子區(qū)基因的多態(tài)性，并探討其與我國多發(fā)性硬化(MS)及視神經脊髓炎(NMO)患者遺傳易感性的關系，從遺傳學角度對MS及NMO進行鑒別。 2.研究MS及NMO患者血清和腦脊液VEGF水平及腦脊液αB晶狀體蛋白的差異，并探討其與臨床、實驗室及影像學指標的關系，從免疫學角度對MS與NMO進行鑒別。 3.研究MS、NMO及臨床孤立綜合征(CIS)患者腦脊液sAPP、Aβ42水平的差異，及其與臨床

2、、實驗室及影像學指標的關系，探討APP對MS、NMO軸突損害評估及早期推測病情預后的作用。 4.研究MS、NMO及CIS患者血清及腦脊液BDNF、GDNF水平的差異，及其與臨床、實驗室及影像學指標的關系，探討B(tài)DNF、GDNF對MS、NMO的神經保護作用。 方法：對124例符合入選標準的MS、NMO及CIS患者及78例對照組進行研究，其中MS患者分為OSMS及CMS兩組。對所有MS、NMO及CIS患者復發(fā)期及緩解期進行E

3、DSS評分，對95例MS、NMO及CIS患者進行頭顱、脊髓及視神經MRI檢查，5例MS患者進行了MRS及DTI檢查，對109例MS、NMO及CIS患者進行了血清及腦脊液寡克隆帶定量、定性測定。用酚/氯仿抽提法從患者及健康對照組全血標本中提取DNA，PCR擴增AQP4啟動子區(qū)基因(AQP4-Promoter0和AQP4-Promoter1基因)，再對PCR產物進行純化、測序，通過與GenBank公布的人類AQP4基因序列比較，尋找陽性突變

4、位點。應用Western-blot法檢測患者及對照組腦脊液中的sAPP及αB晶狀體蛋白；用液相芯片分析技術檢測血清及腦脊液BDNF、GDNF、VEGF、Aβ42濃度；用ELISA法檢測腦脊液αsAPP濃度。 結果： 1.成功擴增并測定了80例患者(其中NMO8例、MS47例、CIS25例)和39例對照組的AQP4啟動子區(qū)基因序列，共發(fā)現(xiàn)14個AQP4-promoter0陽性突變位點及6個AQP4-promoter1陽性突

5、變位點。其中，MS患者AQP4-promoter0的-1003bp位點突變率(A突變?yōu)镚)比對照組高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.016)；NMO及MS患者AQP4-promoter1的—401bp與—400bp位點之間的突變率(插入1個C)均比對照組高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.027和0.01)。 2.有AQP4啟動子區(qū)基因突變的MS患者出現(xiàn)MRI下丘腦病灶的概率比無基因突變的MS患者高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.047)。

6、 3.NMO、MS及CIS患者發(fā)作期腦脊液VEGF平均熒光強度比對照組高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.015、0.016及0.02)，但NMO與MS、CMS與OSMS患者之間無顯著性差異(P>0.05)。 4.BBB指數(shù)升高組及Tourtellotte合成率升高組NMO及MS患者血清VEGF濃度比上述指標正常組高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.0037及0.021)。 5.Western—Blot結果顯示，NMO、MS、

7、CIS患者及對照組腦脊液中均可檢測到分子量為110Kda及22Kda(分別與sAPP及αB晶狀體蛋白分子量相同)的條帶，各組條帶的灰度強弱無明顯差異。 6.NMO、MS、CIS和對照組腦脊液αsAPP與Aβ42濃度呈正相關關系(Spearman相關系數(shù)為0.37，P=0.011，Kendall's tua—b相關系數(shù)為0.265，P=0.009)，腦脊液αsAPP濃度與EDSS評分呈負相關關系(Spearman相關系數(shù)為—0.3

8、71，P=0.004；Kendall's tua—b相關系數(shù)為—0.258，P=0.007)，EDSS≥4.5分組患者腦脊液αsAPP濃度比EDSS<4.5分組低，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.026)。 7.他汀類藥物治療組患者腦脊液αsAPP水平比無使用該藥治療組患者高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.023)。 8.MS患者腦脊液BDNF濃度比對照組高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.046)；血清與腦脊液BDNF濃度不相關(Pe

9、arson相關系數(shù)為—0.255，P=0.091)。 9.腦脊液BDNF與GDNF濃度呈正相關關系(Spearman相關系數(shù)為0.624，P<0.01；Kendall's tua—b相關系數(shù)為0.494，P<0.01)。 10.血清GDNF濃度與EDSS評分呈正相關(Spearman相關系數(shù)為0.303，P=0.025；Kendall's tua—b相關系數(shù)為0.203，P=0.038)，EDSS≥4.5分的患者血清GD

10、NF濃度比EDSS<4.5分的患者高，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.045)。 11.腦脊液BDNF、GDNF均與Aβ42呈正相關(Spearman相關系數(shù)分別為0.251及0.420，P<0.05；Kendall's tua—b相關系數(shù)分別為0.179及0.308，P<0.05)。 12.10名有MRI結果的NMO患者中，有4名(40％)發(fā)現(xiàn)有腦部MRI病灶，均為非特異的皮質下白質改變；5名行MRS檢查的MS患者均顯示病灶

11、區(qū)NAA含量下降，且與腦脊液αsAPP水平升高相關。 結論： 1.成功完成了AQP4啟動子區(qū)基因的擴增及DNA序列測定，發(fā)現(xiàn)了14個AQP4-promoter0陽性突變位點及6個AQP4-promoter1陽性突變位點。其中，AQP4-promoter0中-1003bp位點的突變(A突變?yōu)镚)以及AQP4-promorter1中—401bp與—400bp位點之間的突變(插入1個C)與MS、NMO易感性有關。AQP4啟動子

12、區(qū)基因突變與MS患者MRI下丘腦病灶可能有一定的關系。 2.NMO、MS患者發(fā)作期腦脊液VEGF水平比對照組高，但與臨床分型無關。血清VEGF濃度與MS病灶中BBB破壞的形成及CNS內IgG合成有關。 3.sAPP及αB晶狀體蛋白在NMO、MS、CIS患者及對照組腦脊液中均存在，各組含量未見明顯差異。 4.腦脊液αsAPP水平與NMO、MS患者神經功能殘疾及MRS中NAA含量下降相關。腦脊液αsAPP及Aβ42濃

13、度呈正相關，二者可能均可用于MS軸突損傷的評估。他汀類藥物可能通過提高腦脊液αsAPP水平對NMO及MS患者具有神經保護作用。 5.MS患者腦脊液BDNF濃度比對照組高，可能是CNS損傷后機體的一種代償機制。血清與腦脊液BDNF濃度不相關，提示二者來源可能不同。MS、NMO患者腦脊液BDNF與GDNF水平呈正相關關系，二者對神經保護可能具有協(xié)同作用。血清及腦脊液BDNF、GDNF水平與NMO、MS患者神經功能殘疾及軸突損傷相關。