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文檔簡(jiǎn)介
1、NELL-1作為一種生長(zhǎng)因子,對(duì)于骨骼的成正常發(fā)育以及骨和軟骨細(xì)胞分化過(guò)程中胞外基質(zhì)蛋白的產(chǎn)生都非常重要。本研究利用基因芯片和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)篩選并鑒定出轉(zhuǎn)錄因子Nftc2是NELL-1的一個(gè)初級(jí)響應(yīng)基因。并且研究重組蛋白NELL-1對(duì)于ATDC5細(xì)胞系以及小鼠原代軟骨細(xì)胞的作用。Runx2是一種骨軟骨特異性的轉(zhuǎn)錄因子,利用腺病毒載體過(guò)量表達(dá)野生型和顯性負(fù)性突變(DN)的Runx2,發(fā)現(xiàn)Runx2有可能在NELL-1和Nfatc2之間
2、起著調(diào)節(jié)作用。NELL-1可以同時(shí)在轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)水平上誘導(dǎo)Nfatc2基因的表達(dá)并維持較短暫的時(shí)間,而這種誘導(dǎo)作用在DN-Runx2轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞中被顯著抑制,這表明Runx2對(duì)于Nftc2的誘導(dǎo)是必要的。細(xì)胞分化實(shí)驗(yàn)揭示出NELL-1可抑制ATDC-5的細(xì)胞分化,盡管細(xì)胞增殖并未受到影響,但是軟骨分化的特異性基因的表達(dá)降低,并且軟骨節(jié)的形成與蛋白聚糖的積累也受到抑制。而利用siRNA技術(shù)敲除Nfatc2可以使得以上抑制效果得以恢復(fù)。為了進(jìn)
3、一步闡明在體內(nèi)Nell-1、Runx2以及Nfatc2之間的關(guān)系,選取新生的和胚胎不同發(fā)育階段的小鼠,利用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Nell-1、Runx2以及Nfatc2在野生型和Nell-1缺陷型小鼠的股骨中的分布和表達(dá)情況。結(jié)果表明在新生小鼠的股骨中這三種蛋白在野生型小鼠的軟骨膜中共表達(dá),而在.Nell-1缺陷型小鼠的軟骨膜中染色卻很微弱或者完全不存在。因此在NELL-1調(diào)節(jié)的體內(nèi)的或體外的骨軟骨細(xì)胞的分化過(guò)程中,Nfact2有可能起著
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