牛磺酸在重型顱腦創(chuàng)傷裸鼠體內(nèi)的分布及其治療作用.pdf

1、目的:利用活體成像技術(shù)研究?；撬嵩谥匦惋B腦創(chuàng)傷裸鼠體內(nèi)實(shí)時(shí)代謝分布變化情況，并觀察腦創(chuàng)傷后腦組織TauT、GFAP表達(dá)，探討牛磺酸對(duì)重型顱腦創(chuàng)傷的治療機(jī)制。
　　 方法:本課題分為活體成像和免疫組化兩部分，①活體成像部分:取6～8周齡BALB/C裸鼠32只，隨機(jī)數(shù)字表法分為正常(normal)組、假手術(shù)（sham）組、腦創(chuàng)傷染料(TBI-Cy7)組和牛磺酸治療(TBI-Tau)組。后兩組用液壓打擊儀制作左側(cè)腦創(chuàng)傷模型，sham組

2、在左側(cè)相同位置只開(kāi)骨窗，不予打擊。TBI-Tau組、sham組傷后立即尾靜脈注射Cy7-Tau，normal組不做處理，直接注射Cy7-Tau，TBI-Cy7組注射游離Cy7，劑量均為5mg/Kg。給藥后1、2、4、8、12、24 h行活體成像;②免疫組化部分:選用6～8周齡BALB/C小鼠48只，隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)（sham）組、腦創(chuàng)傷(TBI)組和牛磺酸治療(TAU)和，造模同上，TAU組、sham組傷后立即尾靜脈注射Tau（5

3、mg/Kg），TBI組注射無(wú)菌生理鹽水（5mg/Kg）。給藥后12h、24h每組各處死8只，4％多聚甲醛灌注后冰凍連續(xù)切片，行HE染色、GFAP-DAPI、TauT熒光免疫組化染色。
　　 結(jié)果:
　　 1.活體成像:給藥后Tau在正常裸鼠體內(nèi)呈全身彌漫分布，主要通過(guò)腎臟代謝，12h大部分均可排出體外，僅剩膽囊存較高濃度Tau; sham組手術(shù)切口皮緣24h仍有較高濃度Tau富集;TBI-Tau組給藥后24h腦創(chuàng)傷區(qū)域、

4、皮膚切口處有Tau特異富集，Tau在離體腦組織的分布范圍與腦創(chuàng)傷區(qū)域一致;Cy7在裸鼠體內(nèi)彌漫分布于皮下，無(wú)特定器官富集趨勢(shì);
　　 2.HE染色:sham組神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，未見(jiàn)明顯腦創(chuàng)傷;TBI組腦組織充血、水腫，灰質(zhì)和白質(zhì)彌漫性出血灶，腦皮質(zhì)分層結(jié)構(gòu)消失，灰白質(zhì)分界不清，并伴有大量多形核炎性細(xì)胞聚集;Tau組腦組織輕度充血、水腫，實(shí)質(zhì)內(nèi)有局灶性出血，并伴有多形核炎性細(xì)胞聚集。
　　 3.TauT熒光免疫組化結(jié)

5、果:TBI后12h，各組均有TauT表達(dá)于傷側(cè)大腦皮質(zhì)和海馬的血管內(nèi)皮細(xì)胞，偶見(jiàn)個(gè)別神經(jīng)細(xì)胞，與Sham組比較，TBI組12h的皮質(zhì)和海馬中TauT顯著降低(p＜0.05)，TAU組的TauT均顯著高于TBI組(p＜0.05)，傷后24h，與sham組相比，TBI組腦皮質(zhì)無(wú)顯著變化，海馬顯著降低，TAU組TauT表達(dá)較sham組顯著增高，熒光位于血管內(nèi)皮細(xì)胞及少數(shù)神經(jīng)細(xì)胞，數(shù)量增多，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。
　　 4.GFAP熒光免疫組化

6、結(jié)果:TBI后12小時(shí)，sham組中，星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)GFAP陽(yáng)性反應(yīng)較低，細(xì)胞胞體較小，突起纖細(xì)。反應(yīng)性星形細(xì)胞主要局限于TBI組、TAU組腦創(chuàng)傷側(cè)胼胝體及海馬，表現(xiàn)為細(xì)胞GFAP陽(yáng)性反應(yīng)增加，染色加深，突起增多。傷后24小時(shí)，TBI組、TAU組星形細(xì)胞胞體肥大，GFAP陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞明顯增加，在海馬組織中尤其明顯。無(wú)論胼胝體還是海馬組織，TBI組的GFAP在12h、24h均顯著較sham組升高(p＜0.05)，而Tau組與TBI組無(wú)顯著

7、區(qū)別(p＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.活體成像技術(shù)可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)Tau在裸鼠體內(nèi)的分布、代謝，Tau主要通過(guò)腎臟代謝;TBI后Tau特異性富集于腦創(chuàng)傷區(qū)域、皮膚切口處，離體腦組織Tau的分布范圍與腦創(chuàng)傷區(qū)域一致;
　　 2.重型顱腦創(chuàng)傷后小鼠腦組織形態(tài)學(xué)發(fā)生明顯改變，皮層、海馬區(qū)神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重，予?；撬嶂委熀?4h可見(jiàn)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)損傷有所減輕，神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)趨于正常，受損輕微，從形態(tài)學(xué)方面表現(xiàn)出了較