MUC1啟動子在胰腺癌細胞中特異性作用的研究.pdf_第1頁
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1、貴陽醫(yī)學院2012屆碩士研究生學位論文1《中國圖書資料分類法》分類號：單位代碼：10660R657.5學號：S090345貴陽醫(yī)學院2012屆碩士學位論文MUC1啟動子在胰腺癌細胞中特異性作用的研究研究生：姜楠導師：潘耀振教授年級：2009級專業(yè)：外科學(普外科學)2012年5月15日貴陽醫(yī)學院2012屆碩士研究生學位論文3MUC1啟動子在胰腺癌細胞中特異性作用的研究專業(yè)名稱：外科學(普外科)研究生：姜楠導師：潘耀振教授摘要：本研究旨在

2、探討MUC1啟動子驅(qū)動目的基因在胰腺癌細胞中靶向表達的意義。方法：采用nestPCR（“巢式”聚合酶鏈式反應)法擴增MUC1啟動子片段，PCR擴增EGFP基因，將產(chǎn)物插入pEASYT1載體并測序，將測序正確的基因序列分步酶切構建于pShuttle質(zhì)粒上獲得pShuttleMUC1EGFP質(zhì)粒。另將擴增的MUC1啟動子片段酶切連接于已含EGFP報告基因的pEGFPN1質(zhì)粒上，替換掉CMV啟動子，構建pEGFPMUC1N1質(zhì)粒。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)

3、染法將上述兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到MUC1陽性的人胰腺癌細胞株Panc1和MUC1陰性的人宮頸癌細胞株Hela，轉(zhuǎn)染后48小時通過熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測EGFP蛋白的表達情況。結(jié)果：擴增出的MUC1啟動子順勢調(diào)控原件的核心序列與參考序列一致。pEGFPMUC1N1和pShuttleMUC1EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后48小時，報告基因EGFP在Panc1細胞陽性表達，而在Hela細胞內(nèi)不表達。結(jié)論：MUC1啟動子能驅(qū)動EGFP報告基因僅在胰腺癌細胞內(nèi)特

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