斑蝥酸鈉對人胃癌及食管癌細(xì)胞作用的體外實驗研究.pdf

1、南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文斑蝥酸鈉對人胃癌及食管癌細(xì)胞作用的體外實驗研究姓名：梁楓申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)指導(dǎo)教師：王明艷20060201由京中醫(yī)藥大學(xué)2 0 0 6 年同等學(xué)力人員申請碩士學(xué)位論文中文摘要研究目的：( 1 ) 觀察不同濃度的斑蝥酸鈉對人胃癌細(xì)胞株B G C 8 2 3 和人食管癌細(xì)胞株E c a l 0 9 牛K 的影響；( 2 ) 研究斑蝥酸鈉塒細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響；( 3 ) 研究斑蝥酸鈉對捌f

2、相關(guān)皋岡B c l 一2 、P 5 3 表達(dá)的影響。研究方法：( 1 ) 細(xì)胞培養(yǎng) 人胃癌細(xì)胞株B G C 8 2 3 由南京中醫(yī)藥大學(xué)傷寒教研竄惠贈；人食管癌細(xì)胞株E c a l 0 9 購于上海細(xì)胞所。將細(xì)胞培養(yǎng)于含1 0 ％新生牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液L } J ，在3 7 。C ，含5 ％C 0 2 的培養(yǎng)箱中孵育，長滿后用0 ．2 5 ％胰酶消化傳代。( 2 ) 細(xì)胞增殖抑制實驗 采用M 7 r T 法，

3、取處于指數(shù)生長期的人胃癌細(xì)胞株B G C 8 2 3 和人食管癌細(xì)胞株E c a l 0 9 ，加入適量o ．2 5 ％胰酶消化，用含1 0 ％新生牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液配成懸液，用血球細(xì)胞板計數(shù)，并以R P M l l 6 4 0 全成分培養(yǎng)液稀釋兩種絀胞懸液，各配成2 x 1 0 5 ／m l ，取9 6 孔細(xì)胞板，每孔』』I J 細(xì)胞懸液1 8 0 9 l 。將藥液2 0 9 1 分別加入各孔細(xì)胞懸液中，每

4、個劑量重復(fù)4 孔。將含人胃癌細(xì)胞株B G C 8 2 3 、人食管癌細(xì)胞株E c a l 0 9 的細(xì)胞板在3 7 。C ，含5 ％C 0 2 的培養(yǎng)箱巾分別孵育8 h 、1 2 h 、2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 后墩出絀胞培養(yǎng)板，M r I 、T 用無血清R P M l l 6 4 0培養(yǎng)液配成1 m g ／m l 溶液，每孔加1 0 0 9 l ，3 7 ℃溫何4 h ，使M ‘門還原為f o r l n a z a n

5、 ，吸出上清液，力¨入1 0 0 I I t l D M S O 使f o r m a z a n 溶解，混懸儀混勻后川酶標(biāo)儀在4 9 0 n m處測定每孔光密度( A ) 。計算抑制率( ％) ( 卜實驗組A ／X , I 照組A ) x 1 0 0 ％。( 3 ) 形態(tài)學(xué)觀察 用不同濃度的斑蝥酸鈉處理人胃癌細(xì)胞株B G C 8 2 3 和人食管癌細(xì)胞株E c a l 0 9 后，在倒置顯微鏡下觀察用藥組細(xì)胞形j 念變化，并

6、攝影。( 4 ) 細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡測定 耿處于指數(shù)生長期的人胃癌細(xì)胞株B G C 8 2 3 加藥培養(yǎng)1 2 h 、2 d h 后，人食管痛細(xì)胞株E t a l 0 9 加藥培養(yǎng)2 4 h 后，用適量0 ．0 2 ％E D T A進(jìn)行消化，制成單細(xì)胞懸液，1 0 0 0 r ／m i n 離心，P B S 洗滌2 次，配成1 ×1 0 6 ／m l細(xì)胞懸液，7 5 ％冷乙醇2 0 ℃固定，上機(jī)測定前，離心去乙醇，用P B S