磁感慶熱療聯(lián)合hR3體外干預(yù)人食管癌細(xì)胞生長(zhǎng).pdf

1、目的：探討磁性納米顆粒Fe3O4磁場(chǎng)熱療聯(lián)合尼妥珠單抗干預(yù)人食管癌細(xì)胞株的影響。
　　 方法： Western blot檢測(cè)人食管癌高分化細(xì)胞株TE-1、低分化細(xì)胞株Eca109的EGFR表達(dá)狀況，普魯士藍(lán)染色法觀察磁性納米顆粒Fe3O4與細(xì)胞共同孵育后的細(xì)胞形貌，MTT和CellTiter-Glo分別檢測(cè)磁性納米顆粒、hR3、不同濃度磁性納米顆粒聯(lián)合hR3作用于TE-1、Eca109后細(xì)胞活力，磁感應(yīng)熱療作用于TE-1、Eca

2、109細(xì)胞后光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)變化，磁感應(yīng)熱療、hR3單一或聯(lián)合作用于TE-1、Eca109細(xì)胞后熒光顯微鏡觀察凋亡、流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)凋亡，RT-PCR、western blot分別檢測(cè)不同措施處理后bax、bcl-2、PCNA、HSP70 mRNA、蛋白水平。
　　 結(jié)果：人食管癌高分化細(xì)胞株TE-1呈EGFR低表達(dá)(EGFR/β-actin=0.12)，低分化細(xì)胞株Eca109呈EGFR高表達(dá)(EGFR/β-actin=0

3、.52)；磁性納米顆粒Fe3O4與細(xì)胞共同孵育，光鏡下細(xì)胞形態(tài)未變化，胞內(nèi)明顯存在Fe3O4，隨納米顆粒濃度增加，胞內(nèi)Fe3O4顯著增加；0-2mg/ml濃度范圍磁性納米顆粒單獨(dú)及與聯(lián)合hR3培養(yǎng)24h后，MTT顯示，隨粒子濃度升高細(xì)胞活力顯著升高，而CellTiter-Glo則顯示，隨粒子濃度升高細(xì)胞活力顯著降低，提示兩種實(shí)驗(yàn)結(jié)果均存在由Fe3O4所致明顯系統(tǒng)誤差；不同濃度磁感應(yīng)熱療后，光學(xué)顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)TE-1、Eca109細(xì)胞變形

4、、皺縮，且隨粒子濃度增加細(xì)胞形態(tài)變化增加；DAPI染色提示不同處理因素作用于TE-1、Eca109細(xì)胞，隨著粒子濃度增加，細(xì)胞凋亡率明顯增加，F(xiàn)e3O4聯(lián)合hR3組較單-Fe3O4以及單一hR3組有增加；不同處理因素作用于細(xì)胞后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡顯示Eca109/TE-1對(duì)照組、hR3組、磁感應(yīng)熱療組、hR3+磁感應(yīng)熱療組凋亡率分別是2.2±0.36/4.9±0.28、3.6±0.29/5.3±0.14、3.6±0.29/5.3±0.

5、14、2.5±0.32/6.2±0.22，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.5)；RT-PCR、western blot提示不同處理因素處理后bax mRNA、蛋白水平升高，bcl-2、PCNA、HSP70 mRNA、蛋白水平均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.5)。
　　 結(jié)論：人食管癌低分化細(xì)胞株Eca109呈EGFR高表達(dá)，高分化細(xì)胞株TE-1呈EGFR低表達(dá)。Fe3O4可被人食管癌細(xì)胞吞噬，對(duì)其形態(tài)卻無(wú)明顯影響。MTT法和Ce