表皮生長(zhǎng)因子提高大腸癌化療敏感性的體外研究.pdf

1、目的: 采取體外研究的方法，探討表皮生長(zhǎng)因子（EGF）在大腸癌化療中的可能作用及其機(jī)制。 方法: MTT法檢測(cè)不同濃度的EGF（0.1、1、5、10、50ng/ml）作用于大腸癌細(xì)胞株Caco-2細(xì)胞24h、48h、72h后的細(xì)胞存活率，觀察EGF對(duì)癌細(xì)胞株體外增殖的最佳劑量及時(shí)間效應(yīng)。檢測(cè)Caco-2細(xì)胞未行EGF處理及經(jīng)EGF預(yù)處理24h后，5-Fu、奧沙利鉑、依立替康對(duì)大腸癌細(xì)胞株Caco-2半抑制率IC5

2、0的變化。細(xì)胞按處理方法不同分為八組：①對(duì)照組；②EGF；③5-Fu；④5-Fu+EGF；⑤奧沙利鉑；⑥奧沙利鉑+EGF；⑦依立替康；⑧依立替康+EGF。其中EGF為5ug/ml預(yù)處理24h。AnnexinV-PI流式細(xì)胞術(shù)分析比較EGF與化療藥物聯(lián)用后對(duì)Caco-2的細(xì)胞凋亡率的變化，觀察腫瘤細(xì)胞經(jīng)EGF預(yù)處理后對(duì)化療藥物的敏感性改變。Cyclins/DNA多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)分析EGF對(duì)細(xì)胞周期的影響，初步探討EGF的作用機(jī)制。

3、 結(jié)果: EGF濃度在1至50ng/ml范圍內(nèi)時(shí)對(duì)Caco-2細(xì)胞有明顯的促增殖作用(P<0.05)，5ng/ml作用24h時(shí)其細(xì)胞存活率提高23.1±0.54％，隨著EGF濃度的增大，作用時(shí)間的延長(zhǎng)其促增殖能力反而降低。MTT法測(cè)得Caco-2細(xì)胞未行EGF處理時(shí)，5-Fu、奧沙利鉑、依立替康的半抑制率分別為53.23、5.12、33.47 ug/ml，經(jīng)5ng/mlEGF預(yù)處理細(xì)胞24h后，三種化療藥物對(duì)Caco-2細(xì)胞株的

4、半抑制率IC50是45.12、3.81、27.98 ug/ml。AnnexinV-PI流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率：對(duì)照組凋亡率為6.75±0.64％，EGF組為2.73±0.36％，5-Fu：37.65±1.84％，5-Fu+EGF：60.54±2.12％；奧沙利鉑：51.11±1.89％，奧沙利鉑+EGF：69.23±2.36％；依立替康：41.78±1.68％，依立替康+EGF：66.14±2.01％。CyclinE /DNA雙參數(shù)流

5、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)靜止期（G0期）細(xì)胞在細(xì)胞周期中所占比率：對(duì)照組為67.64±2.36％，EGF組為35.95±1.54％，5-Fu：49.90±1.68％，5-Fu+EGF：32.51±1.94％；奧沙利鉑：42.07±1.85％，奧沙利鉑+EGF：14.46±2.54％;依立替康：49.00±2.35％，依立替康+EGF：24.22±2.12％。 結(jié)論: EGF可促進(jìn)Caco-2細(xì)胞增殖，濃度為5ng/ml作用24h時(shí)促